Zestaw Direct RT-qPCR III
Opis zestawu:
◮Zestaw Direct RT-qPCR, wykorzystujący Foreasy Reverse Transcriptase i Foreasy HS Taq DNA Polymerase opracowany przez firmę Foregene, z unikalnym buforem reakcyjnym, sprawia, że zestaw ten charakteryzuje się dużą odpornością i kompatybilnością oraz może bezpośrednio testować reakcję z użyciem systemu Foregene Lysis jako matrycy.Ten zestaw może ubiegać się o opracowanie zestawu do wykrywania kwasu nukleinowego COVID-19 i zestawu do wykrywania kwasu nukleinowego innych bakterii chorobotwórczych.
Opis
Zestaw Direct RT-qPCR zawiera oddzielnie zapakowany bufor RT-qPCR (z mieszanką polimerazy Foreasy HS Taq DNA) i wysoce wydajnyForeasy odwrotna transkryptaza (MMLV),dzięki czemu jest wygodny do tworzenia zestawów zaplecza i regulacji systemu w ramach prostej weryfikacji.
Zestaw Direct RT-qPCR, wykorzystujący Foreasy Reverse Transcriptase i Foreasy HS Taq DNA Polymerase opracowany przez firmę Foregene, z unikalnym buforem reakcyjnym, sprawia, że zestaw ten charakteryzuje się dużą odpornością i kompatybilnością oraz może bezpośrednio testować reakcję z użyciem systemu Foregene Lysis jako matrycy.Ten zestaw może ubiegać się o opracowanie zestawu do wykrywania kwasu nukleinowego COVID-19 i zestawu do wykrywania kwasu nukleinowego innych bakterii chorobotwórczych.
Ten zestaw może być bezpośrednio składnikiem produktu IVD, używając go łatwo i szybko.Wymaga jedynie łatwej weryfikacji, bez ponownego rozwijania.
Specyfikacje
500 ton, 50 000 ton
Elementy zestawu
| Zawartość zestawu (układ reakcyjny 20 μl) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 ton | 50 000 ton | |
| Foreasy Rtranskryptaza everse(200 jedn./μL) | 50 μl×1 | 1 ml×5 |
| 2× Bezpośredni qPCRMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instrukcja | 1 | 1 |
Kroki operacyjne
A: Przygotuj szablon i odczynnik
1. Przygotuj przygotowaną matrycę RNA (zaleca się użycie zestawu serii Foregene Total RNA Isolation Kit do ekstrakcji i oczyszczenia matrycy RNA) lub próbkę produktu do krakowania (zaleca się użycie systemu Foregene Lysis), specyficzne startery (10 μM) i inne odpowiednie materiały eksploatacyjne, instrument.
2. Umieść 2x Direct RT-qPCR Buffer, ddH2O bez RNazy i 20x ROX Reference Dye (jeśli jest to potrzebne) w pudełku z lodem, aby rozpuściły się naturalnie i delikatnie wymieszaj.
B: Przygotowanie systemu RT-qPCR
Uzyskaj połowę objętości buforu reakcyjnego systemu reakcyjnego (na przykład, jeśli objętość systemu wynosi 20 μl, należy pobrać 10 μl 2× Direct RT-qPCR Buffer). Dlaodpowiednią ilość enzymu, sugerujemy toM-MLV: układ reakcyjny 10-30 U/20 μl,Takpolimeraza DNA：Układ reakcyjny 1-2 U/20 μlto jest nasza sugestia, powinieneś ją przetestować i dostosować), dodaj matrycę RNA, specyficzne startery i sondy oraz dodaj ddH wolne od RNaz20 do 20 μl.Konkretne przygotowanie systemu reakcji RT-qPCR można odnieść do poniższej tabeli 1.
Tabela 1: Przygotowanie systemu RT-qPCR
| Część | Tom | Stężenie końcowe |
| 2× bezpośredni bufor RT-qPCR | 10 μl | 1× |
| Foreasy odwrotna transkryptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Polimeraza DNA Foreasy HS Taq | 1-2 U | |
| Podkład do przodu (10 μM) | 0,8 μl | 50-900nM |
| Podkład odwrotny (10 μM) | 0,8 μl | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1 ul | 200nM |
| Matryca (RNA lub lizat) | X μl | |
| 20× barwnik referencyjny ROX | - | 1* |
| wolne od RNazyddH2O | (6,4-X) μl | |
| Maksymalna głośność | 20 μl |
Uwaga: Forward Primer i Reverse Primer to specyficzne startery genu docelowego.System qPCR można dostosować zgodnie z praktycznymi modelami eksperymentalnymi i PCR.Zalecamy 400nM dla końcowego stężenia większości starterów.Proszę dostosować objętość określonych starterów i sond zgodnie z przygotowanym stężeniem i zalecanym stężeniem końcowym.
1*: Wybierz odpowiednie stężenie końcowe ROX Reference Dye zgodnie z różnymi ilościowymi instrumentami do PCR.Optymalne stężenie barwnika referencyjnego ROX w typowych urządzeniach do ilościowego PCR przedstawiono w poniższej tabeli:
| Ilościowe instrumenty PCR | Końcowe stężenie barwnika referencyjnego ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/krok pierwszy,itp. | 1× (na przykład dodać 1 μl 20×ROX Reference Dye w 20 μl układu reakcyjnego) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P i Mx4000 itp. | 0,5× (na przykład dodać 0,5 μl 20×ROX Reference Dye w 20 μl układu reakcyjnego) |
| Instrument Roche PCR, Bio-Rad PCR, Eppendorf ilościowy PCR itp. | Bez barwnika referencyjnego ROX |
Przechowywanie i trwałość
Zestaw należy przechowywać w temperaturze -20 ± 5℃.Należy go natychmiast przechowywać w lodówce z termostatem -20 ℃.Okres ważności wynosi 2 lata, jeśli jest przechowywany w odpowiednich warunkach.
