Zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt Zestawy do ekstrakcji i oczyszczania całkowitego RNA dla tkanek i komórek zwierzęcych
Opis zestawu:
Szybko i wydajnie wyodrębnij całkowity RNA o wysokiej czystości i wysokiej jakości z różnych tkanek zwierzęcych.
Nie musisz się martwić o degradację RNA.Cały system jest wolny od RNaz
Skutecznie usuwaj DNA za pomocą DNA-Cleaning Column
Usuń DNA bez dodawania DNazy
Proste — wszystkie operacje są wykonywane w temperaturze pokojowej
Szybko — operacja może zostać zakończona w ciągu 30 minut
Bezpieczny — nie stosuje się żadnych odczynników organicznych
Wysoka czystość — OD260/280≈1,8-2,1
Opisy zestawów
50 przygotowań, 200 przygotowań
Ten zestaw wykorzystujezakręć kolumnę i formułęopracowany przez naszą firmę, który może z wysoką wydajnością ekstrahować całkowity RNA o wysokiej czystości i wysokiej jakości z różnych tkanek zwierzęcych. Zapewnia wydajną kolumnę czyszczącą DNA, która może łatwo oddzielić i zaadsorbować genomowe DNA z supernatantu i lizatu tkankowego, proste i oszczędzające czas;Kolumna tylko z RNA może skutecznie wiązać RNA i może być przetwarzana jednocześnie dzięki unikalnej formule Wiele próbek.
Cały system jest wolny od RNaz, dzięki czemu wyekstrahowany RNA nie ulega degradacji;Buffer RW1, Buffer RW2 system płukania bufora, dzięki czemu otrzymany RNA jest wolny od zanieczyszczeń białkowych, DNA, jonowych i związków organicznych.
Elementy zestawu
| Zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt | ||
| Elementy zestawu | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 ton | |
| Bufor RL1* | 25ml | 100 ml |
| Bufor RL2 | 15 ml | 60ml |
| Bufor RW1* | 25ml | 100 ml |
| Bufor RW2 | 24ml | 96 ml |
| ddH2O wolne od RNaz | 10ml | 40ml |
| Kolumna zawierająca tylko RNA | 50 | 200 |
| Kolumna do czyszczenia DNA | 50 | 200 |
| Instrukcja obsługi | 1 kawałek | 1 kawałek |
Informacje o produkcie
| Format | Kolumna wirująca | Składnik oczyszczający | Kolumna Foregene, odczynnik |
| Strumień | 1-24 próbki | Czas na przygotowanie | ~30 min (24 próbki) |
| Odwirować | Wirówka biurkowa | Separacja pirolityczna | Separacja odśrodkowa |
| Próbka | Tkanka zwierzęca;komórka | Ilość próbek | Tkanka: 10-20 mg;Komórka:(1-5)×106 |
| Objętość elucji | 50-200 μl | Maksymalna objętość ładowania | 850 μl |
Funkcje i zalety
■ Nie trzeba się martwić o degradację RNA;cały system jest wolny od RNaz
■ Skutecznie usuwaj DNA za pomocą DNA-Cleaning Column
■ Usuń DNA bez dodawania DNazy
■ Proste — wszystkie operacje są wykonywane w temperaturze pokojowej
■ Szybka — operacja może zostać zakończona w ciągu 30 minut
■ Bezpieczny — nie wymaga odczynnika organicznego
■ Wysoka czystość -OD260/280≈1,8-2,1
Aplikacja zestawu
Nadaje się do ekstrakcji i oczyszczania całkowitego RNA z różnych świeżych lub mrożonych tkanek zwierzęcych lub hodowanych komórek.
Parametry produktu
■ Dalsze zastosowania: synteza pierwszej nici cDNA, RT-PCR, klonowanie molekularne, Northern Blot itp.
■ Próbki: tkanki zwierzęce, hodowane komórki
■ Dawkowanie: Tkanki 10-20mg, Komórki(2-5)×106
■ Maksymalna zdolność wiązania DNA przez kolumnę oczyszczającą: 80 μg
■ Objętość elucji: 50-200 μl
Diagram
Zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt leczonych 20 mg
Świeże próbki myszy, weź 5% oczyszczonego całkowitego RNA 1% agaru
Elektroforeza glikożelowa
1: Śledziona 2: Nerka
3: Wątroba 4: Serce
Przechowywanie i trwałość
Zestaw można przechowywać przez 24 miesiące w temperaturze pokojowej (15–25 ℃) lub 2–8 ℃ przez dłuższy czas.Bufor RL1 można przechowywać w temperaturze 4°C przez 1 miesiąc po dodaniu β-merkaptoetanolu (opcjonalnie).
Cytowane artykuły
1.JEŻELI:18,808:Q. Zheng, F. Qin, R. Luo i in.Nanocząsteczki podobne do lipidów obciążone mRNA do edycji podstawy wątroby poprzez optymalizację centralnego projektu kompozytowego.adw.FunkcjaMatko.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.JEŻELI:18,187:On X, Hong W, Yang J i in.Spontaniczna apoptoza komórek w terapeutycznym preparacie komórek macierzystych wywiera działanie immunomodulujące poprzez uwalnianie fosfatydyloseryny.Sygnał Transduct Target Ther.14 lipca 2021 r.;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.JEŻELI: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J i in.Modyfikacja tRNA N7-metyloguanozyny zwiększa translację onkogennego mRNA i promuje progresję wewnątrzwątrobowego raka dróg żółciowych.Komórka Mol.29 lipca 2021 r.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.JEŻELI: 9,225:Cao X, Shu Y, Chen Y i in.Modyfikacja m6A za pośrednictwem Mettl14 ułatwia regenerację wątroby poprzez utrzymanie homeostazy retikulum endoplazmatycznego.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Zestawy do izolacji RNA dla inne przykładowe źródłasą dostępne:
Komórka, roślina, wirus, krew itp.
RNA nie jest ekstrahowany lub wydajność RNA jest niska
Często istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność odzyskiwania, takich jak: zawartość RNA w próbce tkanki, metoda działania, objętość elucji itp.
1. Podczas pracy wykonano łaźnię lodową lub wirowanie kriogeniczne (4°C).
Zalecenia: Przez cały proces pracować w temperaturze pokojowej (15-25°C), nie stosować kąpieli lodowej i wirować w niskich temperaturach.
2. Niewłaściwa konserwacja próbki lub zbyt długi czas jej przechowywania.
Zalecenie: Przechowywać próbki w temperaturze -80°C lub zamrozić w ciekłym azocie i unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania;spróbuj użyć świeżej tkanki lub hodowanych komórek do ekstrakcji RNA.
3. Niewystarczająca liza próbki.
Zalecenie: Podczas homogenizacji tkanki należy upewnić się, że tkanka jest wystarczająco zhomogenizowana i że komórki tkanki są wystarczająco podzielone, aby wyjaśnić uwalnianie RNA.
4. Eluent nie jest dodany prawidłowo.
Zalecenie: Potwierdź, że ddH jest wolne od RNaz2O wkrapla się na środek membrany kolumny oczyszczającej.
5. Do buforu Buffer RL2 lub Buffer RW2 nie dodano właściwej objętości etanolu absolutnego.
Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami, dodaj odpowiednią objętość etanolu absolutnego do Buffer RL2 i Buffer RW2 i dobrze wymieszaj przed użyciem zestawu.
6. Dawka próbki tkanki nie jest odpowiednia.
Zalecenie: Użyj 10-20 mg tkanki lub (1-5) × 106komórek na 500 μl buforu RL1, ponieważ nadmierne użycie tkanki może skutkować zmniejszoną ekstrakcją RNA.
7. Niewłaściwa objętość elucji lub niepełna elucja.
Zalecenie: Objętość elucji kolumny oczyszczającej wynosi 50-200 μl;jeśli efekt elucji nie jest zadowalający, zaleca się wydłużenie czasu umieszczenia w temperaturze pokojowej po dodaniu podgrzanego RNazy-Free ddH2O, np. przez 5-10 min.
8. Kolumna oczyszczająca zawiera pozostałości etanolu po przemyciu buforem Buffer RW2.
Zalecenie: Jeśli po przemyciu buforem Buffer RW2 pozostanie etanol, wirowanie z pustą probówką przez 1 min., czas operacji wirowania z pustą probówką można wydłużyć do 2 min lub umieścić kolumnę oczyszczającą w temperaturze pokojowej na 5 min w celu odpowiedniego usunięcia resztek etanolu.
Oczyszczony RNA ulega degradacji
Jakość oczyszczonego RNA jest związana z takimi czynnikami, jak konserwacja próbki, zanieczyszczenie RNazą, manipulacja itp.
1. Próbki tkanek nie są przechowywane na czas.
Zalecenie: Jeśli próbki tkanki lub komórki nie zostaną użyte w odpowiednim czasie po pobraniu, należy natychmiast poddać kriokonserwacji w temperaturze -80°C lub w ciekłym azocie.Aby wyekstrahować RNA, w miarę możliwości używaj świeżo pobranej próbki tkanki lub komórki.
2. Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie próbek tkanek.
Zalecenie: Podczas przechowywania próbek tkanek najlepiej jest pociąć je na małe kawałki w celu konserwacji i usunąć jeden z nich podczas ich używania, aby uniknąć wielokrotnego zamrażania-rozmrażania próbki i degradacji RNA.
3. RNaza jest wprowadzana lub nie ma na sobie rękawiczek jednorazowych, maseczek itp. podczas zabiegu.
Zalecenie: Eksperymenty z ekstrakcją RNA najlepiej przeprowadzać w oddzielnych pomieszczeniach do manipulacji RNA, a stół jest czyszczony przed eksperymentem.
Podczas eksperymentu należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski, aby zminimalizować degradację RNA spowodowaną wprowadzeniem RNazy.
4. Odczynniki są zanieczyszczone RNazą podczas użytkowania.
Zalecenie: Wymień na nowy zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt do podobnych eksperymentów.
5. Probówki wirówkowe, końcówki itp. używane do manipulacji RNA są zanieczyszczone RNazą.
Zalecenie: Potwierdź, że wszystkie probówki wirówkowe, końcówki, pipety itp. używane do ekstrakcji RNA są wolne od RNaz.
Oczyszczony uzyskany RNA wpływa na dalsze eksperymenty
RNA oczyszczony przez kolumnę oczyszczającą, jeśli jony soli, zawartość białka jest zbyt duża, wpłynie to na dalszy eksperyment, taki jak: odwrotna transkrypcja,Northern Blot et al.
1. Eluowany RNA zawiera reszty jonów soli.
Zalecenie: Potwierdź, że do buforu Buffer RW2 dodano odpowiednią objętość etanolu i wykonaj 2 przemywania kolumny oczyszczającej przy prędkości wirowania wskazanej do działania;jeśli są jakiekolwiek pozostałości jonów soli, pozostaw kolumnę oczyszczającą w Buffer RW2 na 5 min w temperaturze pokojowej i wykonaj wirowanie, aby zmaksymalizować usunięcie zanieczyszczeń solnych.
2. Pozostałość etanolu w eluowanym RNA.
Zalecenie: Potwierdź, że po przemyciu buforem RW2 wykonaj operację wirowania pustych probówek przy prędkości wirowania wskazanej dla tej operacji, zwiększ czas operacji wirowania pustych probówek do 2 min, jeśli nadal są pozostałości etanolu, lub pozostaw w temperaturze pokojowej przez 5 minut po wirowaniu pustych probówek, aby zmaksymalizować usunięcie pozostałości etanolu.
