Niski stosunek A260/A230 jest zwykle spowodowany zanieczyszczeniami o maksymalnej długości fali absorpcji przy 230 nm.Zobaczmy, co zawierają te zanieczyszczenia:

• Powszechne zanieczyszczenia	Długość fali absorpcji	Efekt proporcji
  Białko	~230nm i 280nm	Jednoczesna redukcja A260/A 280i A260/A 280proporcje
  Sól guanidyny	220-240 nm	Zmniejsz A260/A 280stosunek
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm i 270nm	Zmniejsz A260/A 280stosunek
  EDTA	~230nm	Zmniejsz A260/A 280stosunek
  Etanol	230-240 nm	Zmniejsz A260/A 280stosunek

 
 
 
Długość fali absorpcji i wartość kontrastu typowych zanieczyszczeń

Pzanieczyszczenie roteiną
Zanieczyszczenia białkowe można uznać za najpowszechniejsze zanieczyszczenia w procesie ekstrakcji kwasów nukleinowych.Białko występuje pomiędzy górną fazą wodną a dolnąorganicznyfaza .Zanieczyszczenie zmniejszy jednocześnie stosunek A260/A280 i A260/A230, a stosunek A260/A230 zmieni się bardziej wyraźnie niż stosunek A260/A280.
Podczas kolejnychtranskrypcja odwrotnaor reakcje qPCR, reszty białkowe mogą hamować lub zakłócać działanie enzymów.Najlepszym sposobem na uniknięcie zanieczyszczenia białkami jest przestrzeganie zasady „raczej mniej niż więcej, niewielką ilość wiele razy” podczas odsysania supernatantu.

2. Zanieczyszczenie guanidyną
chlorowodorek (GuHCl) i tiocyjanian guanidyny (GTC) mają działanie denaturujące białka, które mogą szybko zniszczyć błony komórkowe podczas procesu ekstrakcji kwasu nukleinowego, powodując denaturację i wytrącanie białek.Długość fali absorpcji GuHCl i GTC mieści się w zakresie 220-240 nmresztkowa sól guanidyniowa zmniejszy stosunek A260/A230.Chociaż resztkowa sól guanidyniowa zmniejszy stosunek,wpływ na późniejsze eksperymenty jest w rzeczywistości znikomy.

3. zanieczyszczenie trizolem
Głównym składnikiem Trizolu jest fenol.Główną funkcją fenolu jest liza komórek i uwalnianie białek i substancji kwasu nukleinowego w komórkach.Chociaż fenol może skutecznie denaturować białka, nie może całkowicie hamować aktywności RNazy.Dlatego do TRIzolu dodaje się 8-hydroksychinolinę, izotiocyjanian guanidyny, β-merkaptoetanol itp., aby zahamować endogenną i egzogenną RNazę.
Podczas ekstrakcji komórkowego RNA Trizol może szybko zlizować komórki i hamować nukleazę uwalnianą z komórek, a pozostały Trizol znacznie zmniejszy stosunek A260/A230.
Metoda przetwarzania: Podczas wirowania należy zwrócić uwagę, że fenol zawarty w Trizolu jest łatwo rozpuszczalny w fazie wodnej w temperaturze 4°C i temperaturze pokojowej.

4. Pozostałość etanolu
Etanol jest używany w końcowym procesie do wytrącenia DNA podczas rozpuszczania jonów soli, które mogą być związane z DNA.Długość fali absorpcji najwyższaszczyt absorpcji oketanol jest również przy 230-240 nm, cozmniejszy również stosunek A260/A230.
Metodę unikania pozostałości etanolu można powtórzyć dwukrotnie podczas końcowej elucji, przedmuchującokap wyciągowyprzez dwie minuty, aby umożliwić całkowite odparowanie etanolu przed dodaniem buforu do elucji.
Należy jednak wiedzieć, że stosunek ten jest jedynie wskaźnikiem oceny jakości RNA.Jeśli wyżej wymienione operacje są ściśle regulowane, odchylenie między stosunkiem a standardowym zakresem nie będzie miało dużego wpływu na późniejsze eksperymenty.
Produkty powiązane:
Zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt
Zestaw do izolacji całkowitego RNA roślin
Zestaw do izolacji całkowitego RNA komórek
Zestaw do izolacji całkowitego RNA roślin Plus