(96-dołkowy) zestaw QuickEasy Cell Direct RT-qPCR — SYBR Green I
Opisy
The(96 dołków) QuickEasyTM Zestaw Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Izapewniaunikalny system buforów do lizyto szybko uwolnić RNAz hodowanej komórkipróbek do reakcji RT-qPCR, eliminując czasochłonne i pracochłonneproces oczyszczania RNA, a uzyskanie wymaganej matrycy RNA zajmuje tylko 7 minut.The5× bezpośrednia mieszanka RTI2× Direct qPCR Mix-SYBRdostarczony w pudełku może szybko iskutecznie uzyskać ilościowe w czasie rzeczywistymWyniki PCR.
5× Direct RT Mix i 2× Direct qPCR Mix-SYBR mają silną tolerancję na inhibitory i mogą wykorzystywać lizat badanej próbki jako matrycę do wydajnej odwrotnej transkrypcji i swoistej amplifikacji.Odczynnik zawiera unikalną odwrotną transkryptazę firmy Foregene o wysokim powinowactwie do RNA, a także polimerazę Hot D-Taq DNA, dNTPs, MgCl22 , bufor reakcyjny, optymalizator PCR i stabilizator, i może być używany w połączeniu z buforem do lizy do szybkiego, łatwego i dokładnego wykrywania próbki, i ma cechy wysokiej czułości, silnej specyficzności i dobrej stabilności.
Zestaw jest przeznaczony do lizy mikroukładów 96-studzienkowych komórek hodowanych i charakteryzuje się dobrą jednolitością i konsystencją;składniki zestawu zapewniają 96 reakcji lizy, 96 reakcji odwrotnej transkrypcji i 96 x 2 reakcji qPCR, które mogą sprostać 96-dołkowej płytce z komórkami do jednorazowego użytku, unikając zanieczyszczenia spowodowanego wielokrotnym otwieraniem, zamrażaniem i rozmrażaniem odczynników oraz degradacją działania odczynników.
Elementy zestawu
| Skład zestawu ( 50 μL układ lizy/20 μlRT układ reakcyjny /20μL system reakcji qPCR) | DRT-03011 | Uwaga | |
| 96T | |||
| CzęśćI | BuforCL | 5 ml | KomórkaLiza |
| ForegeneProteaza Plus II | 100 μL | ||
| BuforST | 500 μL | ||
| Część II | DNAgumka do mazania | 100 μL | |
| 5× bezpośrednia mieszanka RT | 400 μL | RT | |
| 2× bezpośrednia mieszanka qPCR-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× barwnik referencyjny ROX | 400ul | ||
| RNaza- BezpłatnyddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mroczny | 1 sztuka | 1 porcja | |
*: Odczynnik do lizy DNA Eraser jest zawarty w części II zestawu;Komponenty Cell Lysis, RT i qPCR można zakupić oddzielnie.
Funkcje i zalety
■Proste i skuteczne: dzięki technologii Cell Direct RT próbki RNA można pobrać w zaledwie 7 minut.
■ Zapotrzebowanie na próbki jest niewielkie, można przetestować zaledwie 10 komórek.
■ Wysoka przepustowość: może szybko wykrywać RNA w komórkach hodowanych na 384, 96, 24, 12, 6-dołkowych płytkach.
■ DNA Eraser może szybko usunąć uwolnione genomy, znacznie zmniejszając wpływ na późniejsze wyniki eksperymentów.
■ Zoptymalizowany system RT i qPCR sprawia, że dwuetapowa odwrotna transkrypcja RT-PCR jest bardziej wydajna, a PCR bardziej specyficzny i bardziej odporny na inhibitory reakcji RT-qPCR.
Aplikacja zestawu
Zakres zastosowania: hodowane komórki.
- RNA uwolniony w wyniku lizy próbki: dotyczy tylko matrycy RT-qPCR tego zestawu.
- Zestaw może być używany do następujących celów: analiza ekspresji genów, weryfikacja efektu wyciszania genów za pośrednictwem siRNA, skrining leków itp.
Przechowywanie i trwałość
Część I tego zestawu należy przechowywać w temperaturze 4℃;Część II należy przechowywać w temperaturze -20℃.
Foregene Protease Plus II należy przechowywać w temperaturze 4℃, nie zamrażać w temperaturze -20 ℃.
Odczynnik 2×Direct qPCR Mix-Taqman należy przechowywać w temperaturze -20℃w ciemności;jeśli jest często używany, można go również przechowywać w temperaturze 4℃ do krótkotrwałego przechowywania (zużyć w ciągu 10 dni).
Zasady projektowania starterów do PCR w czasie rzeczywistym
Podkład do przodu i Podkład do tyłu
W przypadku PCR w czasie rzeczywistym projekt startera jest bardzo ważny.Startery są związane ze specyficznością i wydajnością amplifikacji PCR i mogą być zaprojektowane w odniesieniu do następujących zasad:
- Długość startera: 18-30 pz.
- Zawartość GC: 40-60%.
- Wartość Tm: Oprogramowanie do projektowania podkładów, takie jak Primer 5, może podać wartość Tm podkładu.Wartości Tm starterów w górę iw dół powinny być jak najbardziej zbliżone.Można również zastosować wzór obliczeniowy Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Podczas przeprowadzania PCR jako temperaturę przyłączania zazwyczaj wybiera się temperaturę poniżej wartości Tm startera wynoszącej 5°C (odpowiedni wzrost temperatury przyłączania może zwiększyć specyficzność reakcji PCR).
- Startery i produkty PCR:
- Długość produktu amplifikacji PCR startera projektowego wynosi korzystnie 100-150 bp.
- W miarę możliwości należy unikać podkładów projektowych w drugorzędowym obszarze strukturalnym szablonu.
- Unikaj tworzenia 2 lub więcej komplementarnych zasad między końcami 3' starterów w górę iw dół.
- Baza końcowa 3′ startera nie może być obecna z 3 dodatkowymi kolejnymi G lub C.
- Same startery nie mogą mieć komplementarnych struktur, w przeciwnym razie powstanie struktura szpilki do włosów, wpływająca na amplifikację PCR.
- ATCG powinien być rozmieszczony tak równomiernie, jak to możliwe w sekwencji startera, a zasady końcowej 3 'należy unikać, ponieważ T.
Załącznik1：Cell DirectRT-qPCR Element zestawupakiet suplementów
1. Roztwór do lizy komórek
| Roztwór do lizy komórek | |||
| Elementy zestawu (24-dołkowy system lizy / dołek) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ton | 500 ton | ||
| CzęśćI | Bufor CL | 20 ml | 100 ml |
| Proteaza Foregene Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufor ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| CzęśćII | Wymazywanie DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Mieszanka RT | |
| Elementy zestawu (układ reakcyjny 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 ton | |
| 5× bezpośrednia mieszanka RT | 800 μl |
| ddH wolne od RNaz2O | 1,7 ml × 2 |
| Mieszanka qPCR | ||
| Elementy zestawu (układ reakcyjny 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ton | 1000 ton | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× barwnik referencyjny ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH wolne od RNaz2O | 1,7 ml | 10 ml |
Podręczniki:
