FAQ dlaZestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt

Poniższa analiza problemów, które możesz napotkać wekstrakcja RNA z tkanek/komórek zwierzęcych will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA nie jest ekstrahowany lub wydajność RNA jest niska

Często istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność odzyskiwania, takich jak: zawartość RNA w próbce tkanki, metoda działania, objętość elucji itp.

1. Podczas pracy wykonano łaźnię lodową lub wirowanie kriogeniczne (4°C).

Zalecenia: Przez cały proces pracować w temperaturze pokojowej (15-25°C), nie stosować kąpieli lodowej i wirować w niskich temperaturach.

2. Niewłaściwa konserwacja próbki lub zbyt długi czas jej przechowywania.

Zalecenie: Przechowywać próbki w temperaturze -80°C lub zamrozić w ciekłym azocie i unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania;spróbuj użyć świeżej tkanki lub hodowanych komórek do ekstrakcji RNA.

3. Niewystarczająca liza próbki.

Zalecenie: Podczas homogenizacji tkanki należy upewnić się, że tkanka jest wystarczająco zhomogenizowana i że komórki tkanki są wystarczająco podzielone, aby wyjaśnić uwalnianie RNA.

4. Eluent nie jest dodany prawidłowo.

Zalecenie: Potwierdź, że ddH jest wolne od RNaz₂O wkrapla się na środek membrany kolumny oczyszczającej.

5. Do buforu Buffer RL2 lub Buffer RW2 nie dodano właściwej objętości etanolu absolutnego.

Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami, dodaj odpowiednią objętość etanolu absolutnego do Buffer RL2 i Buffer RW2 i dobrze wymieszaj przed użyciem zestawu.

6. Dawka próbki tkanki nie jest odpowiednia.

Zalecenie: Użyj 10-20 mg tkanki lub (1-5) × 10⁶komórek na 500 μl buforu RL1, ponieważ nadmierne użycie tkanki może skutkować zmniejszoną ekstrakcją RNA.

7. Niewłaściwa objętość elucji lub niepełna elucja.

Zalecenie: Objętość elucji kolumny oczyszczającej wynosi 50-200 μl;jeśli efekt elucji nie jest zadowalający, zaleca się wydłużenie czasu umieszczenia w temperaturze pokojowej po dodaniu podgrzanego RNazy-Free ddH₂O, np. przez 5-10 min.

8. Kolumna oczyszczająca zawiera pozostałości etanolu po przemyciu buforem Buffer RW2.

Zalecenie: Jeśli po przemyciu buforem Buffer RW2 pozostanie etanol, wirowanie z pustą probówką przez 1 min., czas operacji wirowania z pustą probówką można wydłużyć do 2 min lub umieścić kolumnę oczyszczającą w temperaturze pokojowej na 5 min w celu odpowiedniego usunięcia resztek etanolu.

Oczyszczony RNA ulega degradacji

Jakość oczyszczonego RNA jest związana z takimi czynnikami, jak konserwacja próbki, zanieczyszczenie RNazą, manipulacja itp.

1. Próbki tkanek nie są przechowywane na czas.

Zalecenie: Jeśli próbki tkanki lub komórki nie zostaną użyte w odpowiednim czasie po pobraniu, należy natychmiast poddać kriokonserwacji w temperaturze -80°C lub w ciekłym azocie.Aby wyekstrahować RNA, w miarę możliwości używaj świeżo pobranej próbki tkanki lub komórki.

2. Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie próbek tkanek.

Zalecenie: Podczas przechowywania próbek tkanek najlepiej jest pociąć je na małe kawałki w celu konserwacji i usunąć jeden z nich podczas ich używania, aby uniknąć wielokrotnego zamrażania-rozmrażania próbki i degradacji RNA.

3. RNaza jest wprowadzana lub nie ma na sobie rękawiczek jednorazowych, maseczek itp. podczas zabiegu.

Zalecenie: Eksperymenty z ekstrakcją RNA najlepiej przeprowadzać w oddzielnych pomieszczeniach do manipulacji RNA, a stół jest czyszczony przed eksperymentem.

Podczas eksperymentu należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski, aby zminimalizować degradację RNA spowodowaną wprowadzeniem RNazy.

4. Odczynniki są zanieczyszczone RNazą podczas użytkowania.

Zalecenie: Wymień na nowy zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierząt do podobnych eksperymentów.

5. Probówki wirówkowe, końcówki itp. używane do manipulacji RNA są zanieczyszczone RNazą.

Zalecenie: Potwierdź, że wszystkie probówki wirówkowe, końcówki, pipety itp. używane do ekstrakcji RNA są wolne od RNaz.

Oczyszczony uzyskany RNA wpływa na dalsze eksperymenty

RNA oczyszczony przez kolumnę oczyszczającą, jeśli jony soli, zawartość białka jest zbyt duża, wpłynie to na dalszy eksperyment, taki jak: odwrotna transkrypcja,Northern Blot et al.

1. Eluowany RNA zawiera reszty jonów soli.

Zalecenie: Potwierdź, że do buforu Buffer RW2 dodano odpowiednią objętość etanolu i wykonaj 2 przemywania kolumny oczyszczającej przy prędkości wirowania wskazanej do działania;jeśli są jakiekolwiek pozostałości jonów soli, pozostaw kolumnę oczyszczającą w Buffer RW2 na 5 min w temperaturze pokojowej i wykonaj wirowanie, aby zmaksymalizować usunięcie zanieczyszczeń solnych.

2. Pozostałość etanolu w eluowanym RNA.

Zalecenie: Potwierdź, że po przemyciu buforem RW2 wykonaj operację wirowania pustych probówek przy prędkości wirowania wskazanej dla tej operacji, zwiększ czas operacji wirowania pustych probówek do 2 min, jeśli nadal są pozostałości etanolu, lub pozostaw w temperaturze pokojowej przez 5 minut po wirowaniu pustych probówek, aby zmaksymalizować usunięcie pozostałości etanolu.

Izolacja typów próbek kwasu nukleinowego

Zestawy do izolacji RNA firmy Foregene umożliwiają izolację/ekstrakcję całkowitego RNA z następujących źródeł próbek: tkanki zwierzęce, rośliny, komórki wirusowe, krew itp.

Jak przechowywać zestaw

Przechowywanie w temperaturze pokojowej przez 24 miesiące.