Wstęp:

Cząsteczki RNA mogą oddziaływać w szerokim zakresie z innymi cząsteczkami biologicznymi, takimi jak białko, DNA i RNA, a zatem występują w komórkach i organizmach w postaci kompleksów makrocząsteczkowych.Wśród nich kompleksy RNA-białko to istnienie i funkcja RNA Jedna z ważnych form.RNA pull-down to klasyczna metoda badania przesiewowego i identyfikacji cząsteczek RNA, zwłaszcza oddziałujących białek cząsteczek lncRNA, i jest uznawana przez większość naukowców i międzynarodowe autorytatywne czasopisma akademickie.Dzisiaj FORREGENE podzieli się z Tobą eksperymentalną zasadą i technicznym procesem ściągania RNA, być może będziesz mógł z niego skorzystać

1. Eksperymentalna zasada technologii ściągania RNA:

Transkrypcja in vitro i synteza znakowanych biotyną docelowych fragmentów lncRNA lub lncRNA (w tym fragmentów RNA stosowanych jako kontrole pozytywne i negatywne) oraz inkubacja z ekstraktami komórkowymi;użyć kulek magnetycznych zakotwiczonych w awidynie do zebrania kompleksów RNA-białko lub RNA-RNA. Po dokładnym przemyciu kompleks jest eluowany.W przypadku wykrycia docelowej cząsteczki białka, która oddziałuje z lncRNA, należy przeprowadzić elektroforezę białek na produkcie ściągania RNA, wykryć docelowe białko za pomocą barwienia srebrem i pokroić żel do spektrometrii mas;przeprowadzić również bezpośrednio weryfikację Western blot na rozwijanym produkcie;w przypadku wykrycia W przypadku docelowych cząsteczek RNA, które oddziałują z lncRNA, produkty RNA-pull down są poddawane ekstrakcji RNA i przeprowadzana jest specyficzna detekcja qRT-PCR.

2. Proces eksperymentu z technologią RNA pull down:

3. Obsługa techniczna RNA pull down FOREGENE:

Hodowlę komórkową

Przygotowanie ekstraktu białka całkowitego/jądrowego/osocza

Eksperyment ściągania RNA

Elektroforeza SDS-PAGE, barwienie srebrem

Spektrometria mas i eksperymenty WB

Raport z eksperymentu

4. Przypadek eksperymentalny

Poniższy rysunek przedstawia wyniki detekcji RNA przez FJ Bio-Bio i elektroforezy SDS-PAGE, w której czerwona strzałka oznacza pasmo różnicy:

Grupa badawcza profesora Song Xu z Sichuan University zgromadziła 15 lat długoterminowej akumulacji w dziedzinie badań lncRNA.Foregene Bio i grupa badawcza profesora Song Xu współpracowały, aby uruchomić technologię lncRNA pull down RNA, która da zadowalający wynik twojego eksperymentu.