Enzym Taq typu „hot-start” jest szeroko stosowany.W porównaniu ze zwykłą polimerazą DNA, enzym Taq typu hot-start może skutecznie uniknąć pewnej nieswoistej amplifikacji i tworzenia dimerów starterów oraz może skutecznie poprawić wskaźnik powodzenia amplifikacji docelowego genu.Zwłaszcza w dziedzinie testów genetycznych, enzym Taq typu „hot-start” został uznany za obowiązkowy standard w branży i nie należy stosować zwykłej polimerazy DNA.Jak widać z powyższego, enzymy Taq typu hot-start są szeroko stosowane.Obecnie na rynku krajowym istnieje wiele marek enzymów Taq typu hot-start, ale niewiele jest enzymów Taq typu hot-start o wysokiej jakości.W obliczu tak wielu produktów enzymatycznych Taq z gorącym startem, jak powinniśmy wybrać?

1. Wybierz enzym Taq typu hot-start o wysokiej wydajności amplifikacji

Wydajność amplifikacji PCR jest ściśle związana z wydajnością enzymu Taq.Po zoptymalizowaniu dobrego układu reakcji enzymatycznej Taq wydajność amplifikacji wynosi powyżej 95%, a zakres amplifikacji początkowej ilości matrycy jest szeroki.Zadowalającą amplifikację można uzyskać, gdy zawartość docelowego genu jest niska, a zatrucie nie jest łatwe, gdy ilość matrycy jest wysoka, a wykładniczy okres amplifikacji jest długi.Dla enzymu Taq o słabej wydajności, nawet jeśli system reakcji był wielokrotnie optymalizowany, wydajność amplifikacji jest nadal mniejsza niż 90%, kształt „S” krzywej amplifikacji nie jest oczywisty, nachylenie jest małe, a krzywa jest płaska.Gdy ilość matrycy jest niska, nie można jej amplifikować, a gdy ilość matrycy jest wysoka, efekt amplifikacji nie jest idealny.Dlatego wybór polimeraz DNA o wysokiej wydajności amplifikacji ma kluczowe znaczenie dla powodzenia PCR i qPCR.

2. Wybierz enzym Taq typu hot-start o dużej mocy enzymatycznej

Siła enzymatyczna enzymu Taq jest związana z wydajnością amplifikacji.Ogólnie rzecz biorąc, im silniejsza moc enzymatyczna enzymu Taq typu hot-start, tym dłuższy wykładniczy okres wzrostu amplifikacji PCR, tym bardziej typowa krzywa „w kształcie litery S”, tym wyższa wartość sygnału fluorescencji i tym bardziej odpowiednia do multipleksowej detekcji PCR.Markowe polimerazy DNA o słabej sile enzymatycznej mogą generalnie wspierać tylko reakcje 2-plex.Podczas przeprowadzania reakcji 3-plex krzywa amplifikacji jest niska, wartość sygnału fluorescencji jest niska i nie ma typowej krzywej amplifikacji, więc wyniki są trudne do oceny.

3. Wybierz enzym Taq typu hot-start o wysokiej czułości

Ogólnie rzecz biorąc, polimeraza DNA ma wysoką wydajność amplifikacji i wysoką czułość, ale są też niespójności.Jeśli liczebność docelowego genu w próbce do amplifikacji jest niska, zaleca się przetestowanie czułości amplifikacji enzymu Taq.Najczęstszą metodą wykrywania jest wykonanie 10-krotnego lub 5-krotnego gradientowego rozcieńczenia docelowego fragmentu plazmidu genu, przeprowadzenie detekcji PCR przy niższym rozcieńczeniu i wybranie enzymu Taq typu hot-start o wyższej czułości detekcji.

Z powyższego wynika, że ​​naukowcy muszą wybierać zgodnie z własnymi wymaganiami eksperymentalnymi i warunkami finansowania.Najlepiej jest przeprowadzić eksperyment z amplifikacją z rozcieńczeniem gradientowym, aby wykryć wydajność amplifikacji i czułość enzymu Taq z gorącym startem.

Przykład Foregene'a'Polimeraza DNA Taq:

Polimeraza DNA Foreasy HS Taq

Opis

Polimeraza DNA Foreasy HS Taq to polimeraza DNA, której ekspresja zachodzi w bakteriach inżynieryjnych Escherichia coli za pomocą technologii rekombinacji genów.Enzym jest połączony z unikalnym buforem reakcyjnym, który sprawia, że ​​produkt jest wysoce odporny i kompatybilny, i może bezpośrednio wykorzystywać lizat próbki (system Foregene Lysis) jako matrycę do reakcji wykrywania.

Aplikacja

Jakościowa PCR i ilościowa detekcja PCR oczyszczonych matryc i nieoczyszczonych matryc.

Kontrola jakości

1. Nie wykryto egzogennej aktywności nukleazy

2. Metoda PCR do wykrywania pozostałości genomowego DNA bez gospodarza

3. Może skutecznie amplifikować pojedyncze kopie genów w ludzkim genomie

4. Przechowywać w temperaturze pokojowej przez tydzień, nooczywiste zmiany aktywności

Szczegóły produktu: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/