Budowa systemu SOP

Ustanowienie SOP eksperymentu PCR w celu standaryzacji zachowania personelu eksperymentu.

Eksperymentatorzy ściśle przestrzegają procedur operacyjnych i minimalizują zanieczyszczenie PCR, które może być spowodowane czynnikami ludzkimi lub zapobiegają występowaniu zanieczyszczeń podczas operacji.Ponadto eksperymentator powinien posiadać odpowiednią wiedzę i umiejętności zawodowe, w tym biegłość w obsłudze powiązanego sprzętu, wyjaśnienie całego procesu pracy, opanowanie metod leczenia zanieczyszczeń i laboratoryjnych metod kontroli jakości oraz umiejętność prawidłowej interpretacji wyników badań.

Budowa Standardowego Laboratorium PCR

Laboratorium PCR jest zasadniczo podzielone na cztery obszary, a mianowicie obszar przygotowania odczynników, obszar przetwarzania próbek, obszar amplifikacji i obszar analizy produktów amplifikacji.Pierwsze dwa obszary to obszary przedamplifikacyjne, a dwa ostatnie to obszary poamplifikacyjne.Strefa przedamplifikacyjna i strefa poamplifikacyjna powinny być ściśle oddzielone.Materiały eksperymentalne, odczynniki, papier rejestracyjny, długopisy, materiały czyszczące itp. mogą przepływać tylko z obszaru przed amplifikacją do obszaru po amplifikacji, tj.Przepływ powietrza w laboratorium powinien również płynąć z obszaru przed amplifikacją do obszaru po amplifikacji, a nie w odwrotnym kierunku.

Ogranicz kroki eksperymentalne

Jeśli laboratorium wykonuje tylko wykrywanie i identyfikację metodą PCR, zaleca się stosowanie fluorescencyjnej ilościowej reakcji PCR zamiast konwencjonalnej reakcji PCR.

Wyniki ilościowej detekcji fluorescencji PCR można zbierać i analizować za pomocą sygnałów fluorescencyjnych, więc nie ma potrzeby otwierania pokrywy do elektroforezy po reakcji, co pozwala uniknąć zanieczyszczenia produktów PCR spowodowanego wyciekiem produktów reakcji w celu utworzenia aerozoli.Jeśli zwiększysz liczbę otworów nasadki podczas etapu ładowania elektroforezy żelowej, prawdopodobnie wystąpi zanieczyszczenie aerozolem.Zaleca się promowanie stosowania ilościowego PCR i stopniowe zastępowanie jakościowego PCR.

Zastosuj system przeciwdziałania zanieczyszczeniom UNG

Do reakcji PCR używany jest system anty-PCR firmy UNG do zanieczyszczenia produktu.

System używa dUTP zamiast dTTP.Po reakcji PCR wszystkie produkty PCR (fragmenty DNA) są inkorporowane z dUTP;w kolejnej rundzie reakcji PCR, dodany do układu enzym UNG inkubuje się w temperaturze 37°C przez 5 minut przed PCR, który może być specyficzny Degraduj wszystkie fragmenty DNA zawierające dUTP, a następnie wykonaj reakcję PCR.Może to całkowicie usunąć zanieczyszczenie aerozolem spowodowane przez produkty PCR.Efekt pokazano na poniższym rysunku:

Uwaga: W przypadku serii direct PCR można wybrać produkty seryjne systemu zanieczyszczenia produktu anty-PCR firmy FJ Biotech

Sugerować

W przypadku laboratoriów, które przeprowadzają testy genotypowania na dużą skalę, zdecydowanie zaleca się stosowanie systemu UNG anty-PCR do testowania odczynników, oprócz budowy rozsądnych laboratoriów.

Przypomnienie: Użycie tego systemu nie może usunąć zanieczyszczenia produktu PCR, które już zostało spowodowane.Dlatego system UNG powinien być używany na początku odpowiedniego testu, a system UNG powinien być zawsze używany do amplifikacji PCR, aby zapobiec zanieczyszczeniu produktów PCR.Fałszywie pozytywny.

Podczas przeprowadzania testów na dużą skalę zaleca się stosowanie systemu Direct PCR-UNG firmy Forge Biotech, takiego jak: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Zestaw do bezpośredniego PCR z nasionami roślin-UNG;

Zestaw do bezpośredniego PCR z tkankami zwierzęcymi-UNG;

Zestaw Direct PCR Myszy Ogon-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Ta seria zestawów firmy Foregene może nie tylko szybko i na dużą skalę wykrywać PCR, ale także skutecznie zapobiegać i kontrolować zanieczyszczenie produktu PCR.