Poniższa analiza możliwych problemów wUstnywymaz/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Kolumna oczyszczająca jest zatkana

W tym zestawie podczas operacji ekstrakcji genomowego DNA kolumna oczyszczająca jest bezpośrednio adsorbowana na próbce mieszaniny lizy enzymatycznej bez etapu wirowania, a kolumna oczyszczająca może zostać zablokowana z powodu niepełnej enzymizacji i wysokiej lepkości próbki.

Oto możliwe przyczyny:

1. Niepełne trawienie enzymatyczne próbek tkanek.

Zalecenie: Czas przetwarzania próbki Foregene Protease można odpowiednio wydłużyć lub pobrać supernatant po odwirowaniu przy 12 000 obr./min (~13 400 obr./min.× g) przez 5 min.

2. Nadmierne użycie próbek tkanek lub dużych tkanek.

Zalecenie: Najlepiej nie przekraczać 1Ustny wacik w próbce;jeśli próbka jest zbyt duża, odpowiednio zwiększ dawkę Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2.

3. Lepkość próbki jest zbyt wysoka.

Zalecenie: Próbki można odpowiednio rozcieńczyć 10 mM Tris-HCl przed ekstrakcją genomowego DNA.

4. Fragmenty karty krwi zostały wyssane.

Zalecenie: Przejściowy czas wirowania w etapie 6 ekstrakcji genomowej plamki krwi (karta FTA) można odpowiednio wydłużyć.

Niska wydajność lub brak DNA

Często istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność genomowego DNA, w tym pochodzenie próbki, warunki przechowywania próbki, przygotowanie próbki, manipulacja itp.

Genomowego DNA nie można uzyskać podczas ekstrakcji

Możliwe przyczyny są następujące:

1. Niewłaściwa konserwacja próbek lub zbyt długie przechowywanie prowadzi do degradacji genomowego DNA.

Zalecenie: Próbki wymazów z jamy ustnej powinny być najlepiej świeże i nie zaleca się używania wymazów konserwowanych do operacji ekstrakcji genomowego DNA;próbki krwi powinny zapewniać kwalifikowaną jakość, a czas przechowywania nie powinien być zbyt długi.

2. Zbyt małe użycie tkanki może skutkować brakiem ekstrakcji odpowiedniego genomowego DNA.

Zalecenie: Postępuj zgodnie zBuccal instrukcje pobierania wymazów zawarte w instrukcji obsługi i wycierać tyle razy, ile to możliwe, aby do wymazu z jamy ustnej można było przyczepić wystarczającą liczbę komórek w celu ekstrakcji genomowego DNA;w celu pobrania próbki krwi obszar cięcia plamki krwi można odpowiednio zwiększyć.

3. Proteaza Foregene jest niewłaściwie zakonserwowana, co powoduje spadek jej aktywności lub inaktywację.

Zalecenie: Potwierdzić warunki przechowywaniaForegene Protease lub zastąp ją nową Foregene Protease do reakcji enzymatycznej.

4. Niewłaściwa konserwacja zestawu lub zbyt długi czas przechowywania skutkujący uszkodzeniem niektórych elementów zestawu.

Zalecenie: Kup nowyUstny wymaz DNAizolacja zestaw do powiązanych procedur.

5. Buffer WB nie dodaje etanolu absolutnego.

Zalecenie: Potwierdź, że bufor WB dodaje prawidłową objętość etanolu absolutnego.

6. Eluent nie został prawidłowo dodany do folii silikonowej.

Zalecenie: Dodaj 65°Cwstępnie ogrzany eluent wkrapla się na środek membrany silikonowej i pozostawia w temperaturze pokojowej na 5 min w celu zwiększenia wydajności elucji.

Lgenomowego DNA o niskiej wydajności odosobniony

Oto możliwe przyczyny:

1. Niewłaściwa konserwacja próbek lub zbyt długie przechowywanie prowadzi do degradacji genomowego DNA.

Zalecenie: Wymazy z jamy ustnej najlepiej pobierać ze świeżych próbek, a wymazów konserwowanych nie należy używać do ekstrakcji genomowego DNA.

2. Jeśli ilość próbki tkanki jest zbyt mała, zawartość wyekstrahowanego genomowego DNA będzie mniejsza.

Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami pobierania wymazu z jamy ustnej zawartymi w instrukcji obsługi, wycierając tyle razy, ile to możliwe, aby można było przyczepić do wymazówki wystarczającą liczbę komórek do ekstrakcji genomowego DNA.

3. Proteaza Foregene jest niewłaściwie zakonserwowana, co powoduje spadek jej aktywności lub inaktywację.

Zalecenie: Potwierdzić warunki przechowywaniathe Foregene Protease lub wymienić na nowy Foregene Protease do reakcji enzymatycznej.

4. Problemy z eluentem.

Zalecenie: do elucji użyć Buffer EB;jeśli używasz ddH₂O lub inne eluenty, potwierdź, że pH eluatu mieści się w zakresie 7,0-8,5.

5. Eluat nie jest prawidłowo dodawany kroplami.

Zalecenie: Dodaj krople eluentu na środek membrany silikonowej i pozostaw w temperaturze pokojowej na 5 min, aby zwiększyć skuteczność elucji.

6. Ciecz elucyjna gromadzi się za mało.

Zalecenie: Użyj eluentu do elucji genomowego DNA przynajmniej zgodnie z wymaganiami instrukcjinie mniej niż 15μl.

Ljaka czystość of DNA genomoweodosobniony

Niska czystość genomowego DNA może prowadzić do niepowodzenia lub niezadowalających wyników dalszych eksperymentów, takich jak: enzymy nie mogą zostać rozcięte, PCR nie może uzyskać interesującego fragmentu genu itp.

Możliwe przyczyny są następujące:

1. Zanieczyszczenie heteroproteinami, zanieczyszczenie RNA.

Analiza: Kolumny oczyszczającej nie przemywano buforem Buffer PW;kolumna oczyszczająca do przemywania Buffer PW nie została przemyta przy prawidłowej prędkości wirowania.

Zalecenie: Przed dodaniem etanolu należy upewnić się, że w supernatancie nie wytrącił się osad;pamiętaj, aby przemyć kolumnę oczyszczającą zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.

2. Zanieczyszczenie zanieczyszczeniem jonowym.

Analiza: Kolumnę oczyszczającą do przemywania buforem WB pominięto lub przemyto tylko raz, co skutkowało resztkowym zanieczyszczeniem jonowym.

Zalecenie: Pamiętaj, aby przemyć Buffer WB 2 razy zgodnie z zaleceniami, aby usunąć jak najwięcej resztkowych jonów.

3. Zanieczyszczenie enzymami RNA.

Analiza: Do buforu dodano obce RNazy;Operacja przemywania buforem PW była nieprawidłowa, co skutkowało pozostałościami RNazy, wpływającymi na późniejsze operacje eksperymentalne RNA, takie jak transkrypcja in vitro.

Zalecenie: kwas nukleinowy z serii Foregeneizolazestawy tionowe mogą usuwać RNA bez dodatkowego dodatku RNazy,zatem wymaz z policzka/zestaw do izolacji DNA z karty FTApotrzebne't dodać RNazę;pamiętaj, aby postępować zgodnie z instrukcjami dotyczącymi przemywania kolumny oczyszczającej Buffer PW, a tego kroku nie można pominąć.

4. Pozostałość etanolu.

Analiza: Buffer WB nie wykonał wirowania z pustą probówką po przemyciu kolumny oczyszczającej.

Zalecenie: Wykonaj prawidłową operację wirowania pustej probówki zgodnie z instrukcjami.

5. Inne zanieczyszczenia.

Analiza: Zapisane próbki lub próbki specjalne nie są poddawane obróbce wstępnej.

Zalecenie: Dokładnie przygotować próbkę zgodnie z instrukcją.