-
Szczegółowe podsumowanie metody optymalizacji systemu reakcji eksperymentalnej RT-PCR
一, Zwiększ czułość systemu reakcji: 1. Izoluj wysokiej jakości RNA: Pomyślna synteza cDNA pochodzi z wysokiej jakości RNA.Wysokiej jakości RNA powinno być co najmniej pełnej długości i wolne od inhibitorów odwrotnej transkryptazy, takich jak EDTA lub SDS.Jakość RNA określa maksymalną...Czytaj więcej -
Kompletny projekt startera PCR i szczegóły PCR
Podstawa projektowania podkładu (99% problemów można rozwiązać) 1. Długość podkładu: Podręcznik wymaga 15-30 pz, zwykle około 20 pz.Rzeczywisty stan powinien wynosić 18-24 bp, aby zapewnić specyficzność, ale im dłuższy, tym lepszy, zbyt długi starter również zmniejszy specyficzność i zmniejszy wydajność.2. Pierw...Czytaj więcej -
Środki ostrożności dla qRT-PCR starannie opracowane przez starszego lekarza
Wszyscy mówią o zasadzie eksperymentu qRT-PCR, projektowaniu starterów, interpretacji wyników itp., ale myślę, że powinienem podzielić się z wami eksperymentalnym działaniem qRT-PCR.Jest mały, ale chodzi o wyniki.Przed wykonaniem qRT-PCR musimy mieć jasne zrozumienie naszego ...Czytaj więcej -
Środki ostrożności dotyczące RT-qPCR
Eksperyment RT-qPCR obejmuje ekstrakcję RNA i ocenę jakości, odwrotną transkrypcję i qPCR trzy etapy, każdy krok ma wiele środków ostrożności, które szczegółowo przedstawimy poniżej.Ⅰ.Ocena jakości RNA W eksperymencie RT-qPCR, po zakończeniu ekstrakcji RNA, ...Czytaj więcej -
Dokładne wprowadzenie do PCR w czasie rzeczywistym
1. Wstępne zrozumienie Na tym etapie musimy zrozumieć pewne pojęcia i terminologię, aby uniknąć popełnienia błędów w obecności naszych seniorów, takich jak: P: Jaka jest różnica między RT-PCR, qPCR, Real-time PCR, i RT-PCR w czasie rzeczywistym?Odpowiedź: RT-PCR to PCR z odwrotną transkrypcją (odwrotna t...Czytaj więcej -
PCR, wielokrotny PCR, In situ PCR, Reverse PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR
PCR, wielokrotny PCR, In situ PCR, Reverse PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR Uporządkujemy koncepcje, etapy i szczegóły różnych PCR Ⅰ.PCR Reakcja łańcuchowa polimerazy, określana jako PCR, to technologia biologii molekularnej, która służy do powiększania określonych fragmentów DNA.Można to uznać za...Czytaj więcej -
Zasada eksperymentalna qRT-PCR
RT-qPCR wywodzi się ze zwykłej technologii PCR.Dodaje fluorescencyjne chemikalia (barwniki fluorescencyjne lub sondy fluorescencyjne) do tradycyjnego systemu reakcji PCR i wykrywa proces hybrydyzacji i wydłużania PCR w czasie rzeczywistym zgodnie z ich różnymi mechanizmami luminescencyjnymi.Znak fluorescencyjny...Czytaj więcej -
Szczegółowe podsumowanie metody optymalizacji systemu reakcji eksperymentalnej RT-PCR
Ⅰ.Zwiększ czułość systemu reakcji: 1. Oddziel wysokiej jakości RNA: Pomyślna synteza cDNA pochodzi z wysokiej jakości RNA.Wysokiej jakości RNA powinno zapewniać co najmniej łączną dłuższą żywotność i nie zawiera inhibitorów, które nie zawierają enzymów rejestrujących, takich jak EDTA czy SDS.Jakość...Czytaj więcej -
Jak zapewnić rozsądny zakres wartości Ct dla eksperymentów qPCR
Wartość Ct jest najważniejszą formą prezentacji wyników fluorescencyjnej ilościowej reakcji PCR.Służy do obliczania różnic w ekspresji genów lub liczby kopii genów.Jaka zatem wartość Ct oznaczania ilościowego fluorescencji jest uważana za rozsądną?Jak zapewnić efektywny zakres wartości Ct?Co to jest Ct...Czytaj więcej -
Zwróć uwagę na poniższe szczegóły, aby podwoić wskaźnik sukcesu swojego eksperymentu RT-qPCR!
RT-qPCR to podstawowy eksperyment biologii molekularnej i każdy musi go znać.Obejmuje głównie trzy etapy: ekstrakcję RNA, odwrotną transkrypcję do cDNA i fluorescencyjną ilościową reakcję PCR w czasie rzeczywistym.Nie pomaga, co się dzieje?Prawdopodobnie jest problem z...Czytaj więcej -
Ekstrakcja RNA, 260/230 jest szczególnie niska, a wartość ct w cyklu pcr jest bardzo wysoka.Jak to rozwiązać?
Niski stosunek A260/A230 jest zwykle spowodowany zanieczyszczeniami o maksymalnej długości fali absorpcji przy 230 nm.Zobaczmy, co obejmuje te zanieczyszczenia: Powszechne zanieczyszczenia Długość fali absorpcji Efekt współczynnika Białko ~230nm i 280nm Jednoczesna redukcja A 260 /A 280 i A 260 /A ...Czytaj więcej -
Fluorescencyjny ilościowy PCR (qPCR) – projektowanie starterów
W eksperymentach qPCR projektowanie starterów jest również bardzo ważnym ogniwem.To, czy startery są odpowiednie, czy nie, jest ściśle związane z tym, czy wydajność amplifikacji osiąga standard, czy amplifikowane produkty są specyficzne i czy dostępne są wyniki eksperymentalne.Jak więc zrobić...Czytaj więcej
-
Telefon
-
E-mail
-
WhatsApp
WhatsApp
-
Szczyt