Zestaw Cell Direct RT qPCR — SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Zestawy Cell Ready One-step qRT-PCR Kit
Opisy
Ten zestaw wykorzystuje unikalny system buforów do lizy, który może szybko uwalniać RNA z próbek hodowanych komórek do reakcji RT-qPCR, eliminując w ten sposób czasochłonny i pracochłonny proces oczyszczania RNA.Matrycę RNA można uzyskać w zaledwie 7 minut.5×Bezpośrednia mieszanka RT i 2×Odczynniki Direct qPCR Mix-SYBR dostarczane w zestawie mogą szybko i skutecznie uzyskiwać ilościowe wyniki PCR w czasie rzeczywistym.
5×Bezpośrednia mieszanka RT i 2×Direct qPCR Mix-SYBR mają silną tolerancję na inhibitory, a lizat próbek może być bezpośrednio użyty jako matryca do RT-qPCR.Ten zestaw zawiera unikalną odwrotną transkryptazę Foregene o wysokim powinowactwie do RNA i polimerazę DNA Hot D-Taq, dNTP, MgCl22, bufor reakcyjny, optymalizator PCR i stabilizator.
Specyfikacje
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Elementy zestawu
| Część I | Bufor CL |
| Proteaza Foregene Plus II | |
| Bufor ST | |
| część druga | Wymazywanie DNA |
| 5× bezpośrednia mieszanka RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× barwnik referencyjny ROX | |
| ddH2O wolne od RNaz | |
| Instrukcje | |
Funkcje i zalety
■Proste i skuteczne: dzięki technologii Cell Direct RT próbki RNA można pobrać w zaledwie 7 minut.
■ Zapotrzebowanie na próbki jest niewielkie, można przetestować zaledwie 10 komórek.
■ Wysoka przepustowość: może szybko wykrywać RNA w komórkach hodowanych na 384, 96, 24, 12, 6-dołkowych płytkach.
■ DNA Eraser może szybko usunąć uwolnione genomy, znacznie zmniejszając wpływ na późniejsze wyniki eksperymentów.
■ Zoptymalizowany system RT i qPCR sprawia, że dwuetapowa odwrotna transkrypcja RT-PCR jest bardziej wydajna, a PCR bardziej specyficzny i bardziej odporny na inhibitory reakcji RT-qPCR.
Aplikacja zestawu
Zakres zastosowania: hodowane komórki.
- RNA uwolniony w wyniku lizy próbki: dotyczy tylko matrycy RT-qPCR tego zestawu.
- Zestaw może być używany do następujących celów: analiza ekspresji genów, weryfikacja efektu wyciszania genów za pośrednictwem siRNA, skrining leków itp.
Diagram
Przechowywanie i trwałość
Część I tego zestawu należy przechowywać w temperaturze 4℃;Część II należy przechowywać w temperaturze -20℃.
Foregene Protease Plus II należy przechowywać w temperaturze 4℃, nie zamrażać w temperaturze -20 ℃.
Odczynnik 2×Bezpośredni qPCR Mix-SYBR należy przechowywać w temperaturze -20°C℃w ciemności;jeśli jest często używany, można go również przechowywać w temperaturze 4℃ do krótkotrwałego przechowywania (zużyć w ciągu 10 dni).
Zasady projektowania starterów do PCR w czasie rzeczywistym
Podkład do przodu i Podkład do tyłu
W przypadku PCR w czasie rzeczywistym projekt startera jest bardzo ważny.Startery są związane ze specyficznością i wydajnością amplifikacji PCR i mogą być zaprojektowane w odniesieniu do następujących zasad:
Długość startera: 18-30 pz.
Zawartość GC: 40-60%.
Wartość Tm: Oprogramowanie do projektowania podkładów, takie jak Primer 5, może podać wartość Tm podkładu.Wartości Tm starterów w górę iw dół powinny być jak najbardziej zbliżone.Można również zastosować wzór obliczeniowy Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Podczas przeprowadzania PCR jako temperaturę przyłączania zazwyczaj wybiera się temperaturę poniżej wartości Tm startera wynoszącej 5°C (odpowiedni wzrost temperatury przyłączania może zwiększyć specyficzność reakcji PCR).
Startery i produkty PCR:
Długość produktu amplifikacji PCR startera projektowego wynosi korzystnie 100-150 bp.
W miarę możliwości należy unikać podkładów projektowych w drugorzędowym obszarze strukturalnym szablonu.
Należy unikać tworzenia 2 lub więcej komplementarnych zasad między końcami 3' starterów w górę iw dół.
Podstawa końcowa 3′ startera nie może być obecna z 3 dodatkowymi kolejnymi G lub C.
Same startery nie mogą mieć komplementarnych struktur, w przeciwnym razie powstanie struktura szpilki do włosów, wpływająca na amplifikację PCR.
ATCG powinien być rozmieszczony tak równomiernie, jak to możliwe w sekwencji startera, a zasady końcowej 3 'należy unikać, ponieważ T.
Dodatek 1: Pakiet uzupełniający zestawu Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Roztwór do lizy komórek
|
| |||
| Elementy zestawu (24-dołkowy system lizy / dołek) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ton | 500 ton | ||
| CzęśćI | Bufor CL | 20 ml | 100 ml |
| Proteaza Foregene Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufor ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| CzęśćII | Wymazywanie DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mieszanka
|
| |
| Elementy zestawu (układ reakcyjny 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 ton | |
| 5× bezpośrednia mieszanka RT | 800 μl |
| ddH wolne od RNaz2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Elementy zestawu (układ reakcyjny 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ton | 1000 ton | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× barwnik referencyjny ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH wolne od RNaz2O | 1,7 ml | 10 ml |
Podręczniki:
