Przewodnik po analizie problemu

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Niska wydajność lub brak DNA

Zwykle istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność genomowego DNA, w tym źródło próbki, wiek próbki, warunki przechowywania próbki i operację.

Podczas ekstrakcji nie można było uzyskać genomowego DNA

1. Próbki tkanek są przechowywane niewłaściwie lub zbyt długo, co prowadzi do degradacji genomowego DNA.

Zalecenie: Przechowywać próbki tkanek w ciekłym azocie lub -20°C;spróbuj użyć nowo zebranych próbek do ekstrakcji genomowego DNA.

2. Zbyt mała ilość próbki może spowodować, że odpowiedni genomowy DNA nie zostanie wyekstrahowany.

Sugestia: W przypadku próbek tkanek, które były przechowywane przez długi czas lub uległy znacznej degradacji genomowego DNA, ilość próbek tkanek można odpowiednio zwiększyć w celu wyekstrahowania znacznych ilości genomowego DNA.Ilość próbki można określić zgodnie z potrzebami DNA, ale świeża próbka nie powinna przekraczać 100 mg, a sucha próbka nie powinna przekraczać 30 mg.

3. Próbka nie jest rozdrabniana z ciekłym azotem ani umieszczana zbyt długo po ciekłym azocie.

Sugestia: Podczas ekstrakcji DNA próbka musi być całkowicie zmielona ciekłym azotem, aby rozbić ścianę komórkową;po zmieleniu przenieś próbkę proszku do PL1 podgrzanej do 65°C tak szybko, jak to możliwe (po stopieniu zmielonego proszku genomowy DNA zacznie się szybko rozkładać).

4. Niewłaściwe przechowywanie Foregene Protease skutkuje zmniejszoną lub inaktywowaną aktywnością.

Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub zastąp ją nową Foregene Protease do hydrolizy enzymatycznej.

5. Zestaw jest niewłaściwie przechowywany lub przechowywany zbyt długo, co powoduje awarię niektórych elementów zestawu.

Zalecenie: Zakup nowego zestawu do ekstrakcji genomowego DNA roślin do powiązanych operacji.

6. Niewłaściwe użycie zestawu.

Sugestia: Zakup zestawu do izolacji DNA roślin przeznaczonego do próbek do ekstrakcji i oczyszczania genomowego DNA roślin.

7. Buforuj WB bez dodawania abezwodny etanol.

Zalecenie: Upewnij się, że do buforu Buffer WB została dodana odpowiednia objętość etanolu absolutnego.

8. Eluent nie został prawidłowo nakroplony na membranę krzemionkową.

Sugestia: Dodaj ogrzany wcześniej eluent w temperaturze 65℃kroplami na środek membrany z żelu krzemionkowego i pozostawić w temperaturze pokojowej na 5 minut, aby zwiększyć wydajność elucji.

Ekstrakcja w celu uzyskania genomowego DNA o niskiej wydajności

1. Próbka jest niewłaściwie przechowywana lub przechowywana zbyt długo, co powoduje degradację genomowego DNA.

Zalecenie: Przechowywać próbki tkanek w temperaturze -20℃;spróbuj użyć nowo pobranych próbek tkanek do ekstrakcji genomowego DNA.

2. Jeśli ilość próbek tkanek jest zbyt mała, wyekstrahowany genomowy DNA będzie mniejszy.

Sugestia: Niektóre próbki roślin są bogate w wodę, takie jak rośliny wodne, takie jak glony itp., Dawkę można odpowiednio zwiększyć lub wodę można trochę odwodnić przed operacją.

3. Próbki nie zostały dokładnie zmielone ciekłym azotem lub pozostawiono je zbyt długo w temperaturze pokojowej po zmieleniu.

Sugestia: Rozdrabnianie ciekłym azotem musi być wystarczające, a ściana celi próbki powinna zostać rozbita tak bardzo, jak to możliwe;bezpośrednio po zmieleniu próbkę proszku należy przenieść do 65℃podgrzany bufor PL1 do następnego kroku.

4. Nieużywanie właściwego zestawu.

Zalecenie: Do ekstrakcji i oczyszczania genomowego DNA roślin należy używać dedykowanego zestawu do izolacji DNA roślin.

5. Niewłaściwe przechowywanie Foregene Protease skutkuje zmniejszoną lub inaktywowaną aktywnością.

Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub zastąp ją nową Foregene Protease do hydrolizy enzymatycznej.

6. Problem eluentu

Zalecenie: Proszę użyć Buffer EB do elucji;jeśli używasz ddH₂O lub innych eluentów, upewnij się, że pH eluentu mieści się w zakresie 7,0-8,5.

7. Eluent nie kapie prawidłowo

Sugestia: Dodaj kroplę elucji na środek membrany krzemionkowej i pozostaw ją w temperaturze pokojowej na 5 minut, aby zwiększyć wydajność elucji.

8. Objętość eluentu jest zbyt mała

Sugestia: Proszę użyć eluentu do elucji genomowego DNA zgodnie z instrukcją, co najmniej nie mniej niż 100μl.

Wyekstrahowany genomowy DNA o niskiej czystości

Niska czystość genomowego DNA doprowadzi do niepowodzenia lub słabego efektu dalszych eksperymentów, takich jak: enzym nie może zostać przecięty, a docelowego fragmentu genu nie można uzyskać za pomocą PCR.

1. Różne zanieczyszczenia białkowe, zanieczyszczenia RNA.

Analiza: do przemywania kolumny nie użyto buforu PW;Bufor PW nie był używany do płukania kolumny przy prawidłowej szybkości wirowania.

Sugestia: postaraj się upewnić, że supernatant nie wytrąca się podczas przepuszczania supernatantu przez kolumnę;pamiętaj, aby przemyć kolumnę oczyszczającą buforem PW zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.

2. Zanieczyszczenie zanieczyszczeniem jonowym.

Analiza: Kolumnę płuczącą Buffer WB pominięto lub przemyto tylko raz, co skutkowało resztkowym zanieczyszczeniem jonowym.

Zalecenie: Należy pamiętać o dwukrotnym przemyciu buforem Buffer WB zgodnie z instrukcją, aby w jak największym stopniu usunąć pozostałości jonów.

3. Zanieczyszczenie RNazami.

Analiza: Do buforu dodaje się egzogenną RNazę;nieprawidłowa operacja przemywania w buforze Buffer PW doprowadzi do pozostałości RNazy i wpłynie na dalsze operacje eksperymentalne RNA, takie jak transkrypcja in vitro.

Sugestia: Zestawy do ekstrakcji kwasów nukleinowych z serii Foregene mogą usuwać RNA bez dodatkowej RNazy, a wszystkie odczynniki w zestawie Plant DNA Isolation Kit nie wymagają RNazy;pamiętaj, aby przemyć kolumnę oczyszczającą buforem PW zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.

4. Pozostałości etanolu.

Analiza: Po przemyciu kolumny oczyszczającej Buffer WB nie przeprowadzono wirowania z pustą probówką.

Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami dotyczącymi prawidłowego wirowania pustych probówek.

Instrukcja obsługi:

Instrukcja obsługi zestawu do izolacji DNA roślin