Metody PCR i zanieczyszczenie aerozolem kwasów nukleinowych w laboratoriach testujących kwasy nukleinowe są jak dwie strony medalu.Możemy tylko wybrać, czy go mieć, czy nie, ale nie możemy wybrać, czy go chcemy, czy wydać.

1. Badanie przesiewowe DNA removera

Aby osiągnąć przestrzenne usunięcie skażenia aerozolem kwasu nukleinowego, konieczne jest najpierw wyselekcjonowanie środków do usuwania DNA, które mogą usuwać kwasy nukleinowe w stanie ciekłym.Ponieważ nie ma zbyt wielu środków do usuwania DNA, które naprawdę działają.Aby zapoznać się z metodą eksperymentalną, zapoznaj się z: Środek do usuwania DNA nie może być „tajemniczym zakątkiem” laboratorium!

W tym eksperymencie zmieszano w równych objętościach 100 kopii/μl (CT około 31) plazmidu ASFV i środka do usuwania DNA, co określono ilościowo za pomocą cyfrowej PCR, a następnie poddano reakcji w temperaturze pokojowej odpowiednio przez 10 minut, 20 minut i 30 minut.Po ekstrakcji kwasu nukleinowego przeprowadzono amplifikację qPCR.Porównano kontrolę pozytywną zmieszaną z plazmidem i wodą.Ponieważ eksperyment nie został ukończony w tym samym czasie, może wystąpić pewne odchylenie między wynikami, ale nie ma to wpływu na zakończenie eksperymentu.Do tej pory oceniłem 10 komercyjnych produktów do usuwania DNA.Tylko produkty nr 1, nr 6 i nr 8 mogą skutecznie degradować plazmidowy DNA w stanie płynnym.Inne produkty prawie nie działają.

Tabela 1 Efekt usuwania kwasu nukleinowego przez dostępny w handlu środek do usuwania DNA

2. Eksperyment z efektem usuwania DNA powszechnie stosowanych środków dezynfekujących

1. Badanie przesiewowe powszechnie stosowanych środków dezynfekujących

W laboratoriach powszechnie stosuje się wiele rodzajów środków dezynfekcyjnych: aldehydy, fenole, alkohole, czwartorzędowe sole amoniowe, nadtlenki, preparaty chloru, kwasy i zasady.Działanie dezynfekujące tych środków dezynfekcyjnych na mikroorganizmy zostało w pełni potwierdzone eksperymentalnie, ale nie ma wystarczających danych eksperymentalnych dotyczących degradacyjnego wpływu kwasów nukleinowych.Laboratoria testujące kwasy nukleinowe potrzebują środka dezynfekującego, który nie tylko dobrze dezynfekuje mikroorganizmy, ale także może degradować DNA.Wyniki badań pokazują, że tylko dwa preparaty chloru 84 środek dezynfekujący i kwas trichloroizocyjanurowy oraz 1 M kwas solny spełniają wymagania.Ponieważ 1 M kwas solny jest silnie korozyjny, zaleca się stosowanie preparatów chloru jako odpadów w laboratoriach testujących kwasy nukleinowe.Preparaty z chlorem są jednak żrące dla metali i nie mogą być stosowane do dezynfekcji narzędzi i sprzętu.

Tabela 2 Efekty usuwania DNA różnych rodzajów środków dezynfekujących

2. Minimalne efektywne stężenie preparatów chloru

Środki dezynfekcyjne na bazie chloru mają silne działanie degradujące DNA, ale ze względu na działanie korozyjne i drażniące na metal mogą być stosowane do czyszczenia podłóg, niemetalowych blatów, końcówek do moczenia, probówek wirówkowych i innych elementów testowych.

Zgodnie z „Nowymi wytycznymi technicznymi dotyczącymi dezynfekcji w przypadku epidemii nowego wieńcowego zapalenia płuc”: Zanieczyszczenia (krew, wydzieliny i wymiociny pacjentów) dostępny chlor 5g/L-10g/L środek dezynfekujący zawierający chlor;podłogi, ściany i powierzchnie obiektów wykorzystują dostępny chlor 1 g/l środek dezynfekujący chlor: ubrania, pościel i inne tekstylia są najpierw moczone w środku dezynfekującym chloru z 0,5 g/l dostępnego chloru przez 30 minut, a następnie czyszczone jak zwykle.

Tabela 3 Efekt usuwania DNA różnych stężeń chlorowego środka dezynfekującego

Wyniki testu pokazują, że: gdy efektywne stężenie chloru jest większe lub równe 1,2 g/l, środek dezynfekujący zawierający chlor może całkowicie zdegradować 100 kopii/μl plazmidu, gdy jest używany przez 5 minut.Działając przez 10 minut, 84 środek dezynfekujący o efektywnym stężeniu chloru większym lub równym 0,6 g/l może całkowicie zdegradować 100 kopii/μl plazmidów.

3. Eksperyment usuwania powietrza zanieczyszczonego aerozolem kwasu nukleinowego

Jak oczyścić powietrze zanieczyszczone aerozolami kwasów nukleinowych?Większość myśli dotyczy stworzenia skażonego aerozolem środowiska, a następnie oczyszczenia go lub oczyszczenia kwasów nukleinowych po zanieczyszczeniu.Dla mnie eksperyment, którego nie można powtórzyć, a wyników eksperymentu nie można przeanalizować ilościowo, jest bez sensu, więc zapożyczyłem kilka metod dezynfekcyjnej dezynfekcji powietrza.Patrz „GB27948-2020 Ogólne wymagania dotyczące środków dezynfekujących powietrze” i „Specyfikacje techniczne dezynfekcji”

1. Materiały testowe

1.1 Środek do usuwania DNA: W tym eksperymencie wybrano dwa dostępne w handlu środki do usuwania DNA 6 i 8 w Tabeli 1.

1.2 Plazmid testowy: Biorąc pod uwagę, że wartość CT większości zanieczyszczeń laboratoryjnych będzie wyższa niż 30, stężenie plazmidu genu ASFV użytego tym razem wynosi około 100 kopii/μl, a fluorescencyjny ilościowy CT PCR wynosi około 31,07.Dodać plazmid do flokującego wacika i wysuszyć na powietrzu.

1.3 Instrument testowy: Instrument do dezynfekcji Bilingkehan KVBOX, który jest uprzejmie wspierany przez Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ma doskonałą skuteczność dezynfekcji powietrza środkiem dezynfekującym nadtlenkiem wodoru i może skutecznie zabijać zarodniki i inne mikroorganizmy.

1.4 Przestrzeń testowa: zamknięte okno transferowe o objętości około 0,1 metra sześciennego.

2. Metoda badania

Ilość środka dezynfekującego ustawiona na maszynie do dezynfekcji wynosi 10 ml, a stężenie wynosi 100 ml/m3, czyli znacznie więcej niż „GB27948-2020 Ogólne wymagania dotyczące środków dezynfekujących powietrze”: przy stosowaniu dezynfekcji w aerozolu ilość środka dezynfekującego powinna wynosić ≤10 ml/m3