Testy laboratoryjne rozpoczynają się od pobrania próbki, a pobieranie próbek jest najłatwiejsze do przeoczenia.Najważniejszą rzeczą przy pobieraniu próbek jest wybór właściwego rodzaju próbki, użycie odpowiednich narzędzi do pobierania próbek oraz przeprowadzenie rozsądnego transportu i przetwarzania.

I. Rodzaj próbki

Typowe typy próbek są następujące:

Metoda pobierania próbek może odnosić się do specyfikacji technicznej monitorowania środowiska nowego koronawirusa na rynku handlu rolnego (bazar)”:

1. Pobrać wymazy z wymazów z gardła, rąk, ubrań i innych przedmiotów praktykujących: wymagane jest użycie roztworu do konserwacji wirusów w probówce do pobierania próbek wirusa i całkowite nasączenie bawełnianych wacików do pobierania próbek.Powierzchnia gruntu) jest wielokrotnie nakładana i spłukiwana ponad 3 razy.Jednocześnie konieczne jest wykonanie wielopunktowego próbkowania rozproszonego na powierzchni próbkowanego obiektu.

2. Próbki wymazów z powierzchni żywności: Próbek żywności nie można pobrać bezpośrednio.Żywność, która ma być pobrana, powinna być starannie oddzielona i przechowywana w czystym worku do pobierania próbek przed pobraniem wymazów.Wymagane jest użycie roztworu do konserwacji wirusów w probówce do pobierania próbek wirusów, po całkowitym namoczeniu wacika do pobierania próbek, wielokrotne rozmazywanie i płukanie powierzchni próbki żywności, która ma być pobrana, więcej niż 3 razy.Jednocześnie konieczne jest wykonanie wielopunktowego próbkowania rozłożonego na powierzchni próbki.

3. Pobieranie próbek ścieków: W zależności od rozmieszczenia sieci kanalizacyjnej na rynku należy wybrać 2-3 miejsca poboru próbek ścieków, skupiając się na poborze wewnętrznej sieci rurociągów, kierunku przepływu wody w dół lub na połączeniu z miejską siecią wodociągową.Aby pobrać próbkę wymazu należy zanurzyć go w ściekach z wacikiem do pobierania próbek, aby zaadsorbował ścieki i przepłukać w rurce do pobierania próbek więcej niż 3 razy.Aby pobrać próbki ścieków, użyj plastikowych butelek polietylenowych do pobrania próbek wody ściekowej o objętości 30-500 ml;do zbierania ścieków o objętości większej niż 500 ml można użyć plastikowych wiader polietylenowych lub specjalnych urządzeń do wzbogacania próbek wody na miejscu.Jednocześnie konieczne jest wielopunktowe pobranie próbek rozproszonych dla miejsca poboru próbek ścieków.

4. Próbki zwierzęce: W przypadku żywych zwierząt wymazy można wykorzystać do pobrania wymazów z powierzchni ciała, wymazów z jamy ustnej i gardła oraz wymazów z odbytu, a próbki odchodów lub wydzielin można również pobrać i odpowiednio zarejestrować w metryce.W przypadku próbek zwierząt, które zostały oskórowane itp., należy użyć wacików bawełnianych do pobrania próbek wymazów z powierzchni ciała i jamy ciała.Wymagane jest użycie roztworu do konserwacji wirusów w probówce do pobierania próbek wirusa, aby w pełni przeniknąć do wacika do pobierania próbek, a następnie powtórzyć aplikację powierzchni próbki żywności, która ma zostać pobrana.Shabu więcej niż 3 razy.Jednocześnie konieczne jest wykonanie wielopunktowego próbkowania rozłożonego na powierzchni próbki.

5. Inne urządzenia: pojemniki do transportu i hodowli zwierząt, takie jak klatki lub akwaria.Najpierw obserwuj lub zapoznaj się z określonymi rodzajami zwierząt przechowywanych i hodowanych w pojemniku i pobierz wymazy z wewnętrznej ściany pojemnika lub płynne próbki zawartości.

6. Pobieraj próbki aerozolu w miejscach gromadzenia się ludzi, słabo wentylowanych lokalnych obszarach handlowych, biurach i toaletach.

II.Narzędzia do pobierania próbek
1. Probówka do pobierania krwi
Jeśli w późniejszym czasie konieczne będzie wykonanie badań kwasu nukleinowego i próbek antykoagulantów, do pobrania krwi zaleca się użycie próżniowego naczynia krwionośnego zawierającego antykoagulant EDTA;w przypadku próbek surowicy zaleca się stosowanie próżniowego naczynia krwionośnego bez antykoagulantu.

2. Wacik do pobierania próbek

Zaleca się stosowanie wacików polipropylenowych zamiast wacików z alginianu wapnia lub wacików z drewnianymi drążkami, ponieważ mogą one zawierać substancje inaktywujące niektóre wirusy i hamujące testy PCR.Nie można używać wacików z bawełnianymi główkami, ponieważ włókna bawełniane mają silną adsorpcję białka i nie są łatwo eluowane do późniejszego roztworu konserwującego.

W „Specyfikacjach technicznych mieszanego pobierania i wykrywania kwasów nukleinowych nowego koronawirusa 10 w 1” wyraźnie określono, że „wymazówka powinna być wykonana z poliestru, nylonu i innych materiałów innych niż bawełna i alginian wapnia, a rękojeść powinna być wykonana z materiału innego niż drewno.Punkt zerwania znajduje się około 3 cm od czubka główki wacika, co jest łatwe do złamania”.

CDC w Stanach Zjednoczonych wspomniało również: „Używaj wyłącznie wacików z włókien syntetycznych z trzonkami z tworzywa sztucznego lub drutu.Nie używać wacików z alginianu wapnia ani wacików z drewnianymi trzonkami,ponieważ mogą zawierać substancje inaktywujące niektóre wirusy i hamujące testy PCR.

Obecnie szeroko stosowany jest jednorazowy sterylny nylonowy wacik do flokowania połączony z plastikowym prętem.Wacik flokujący ma lepszą absorpcję i szybkość uwalniania wody.W zależności od różnych miejsc pobierania próbek główka wacika ma również różne rozmiary i włókna.Grubość.”

3. Przykładowe rozwiązanie do konserwacji transportu

Roztwór konserwujący do inaktywacji wirusa: odpowiednia ilość soli guanidyny w stężeniu i różne składniki lizy wirusa mogą bezpośrednio zlizować wirusa w celu uwolnienia kwasu nukleinowego, inaktywacji RNazy i DNazy oraz zapewnienia integralności kwasu nukleinowego, który można wykorzystać do późniejszego wykrywania qPCR.Nie można go używać do hodowli i izolacji wirusa.

Roztwór do transportu i konserwacji wirusów: zawiera sole, aminokwasy, witaminy, glukozę i białko potrzebne do przetrwania wirusa, które mogą utrzymać aktywność wirusa.Może być stosowany do ekstrakcji kwasu nukleinowego i wykrywania wirusa w przyszłości, a także do hodowli i separacji wirusa.

4. Probówka do przechowywania próbek i worek na próbki

Probówka do przechowywania próbek powinna być sterylną plastikową probówką z zakrętką, która nie adsorbuje kwasu nukleinowego.Każda probówka z próbką powinna być przykryta torebką na próbkę, aby zapobiec wyciekowi i zanieczyszczeniu próbki.

III.Substancje zakłócające w próbce

Substancje zakłócające w doświadczeniach PCR

1. endogenny czynnik zakłócający

Substancje obecne w próbce ciała mogą zakłócać wykrywanie innych substancji.

Krew:hem (>1 mg/ml), hemina (>0,1 ng/μl), trójglicerydy, IgG itp.;

Mocz:mocznik (20 mM);

Stołek:polisacharydy roślinne, cholan;

Tkanka:proteaza, kolagen;

mleko: proteaza, jon wapnia;

Narkotyki: antybiotyki, leki przeciwwirusowe, hormony itp.

Inny.

2. egzogenny czynnik zakłócający

Pochodzi z substancji, które mogą zakłócać wykrywanie innych substancji in vitro.Dodatki do próbek i substancje, z którymi można mieć kontakt podczas pobierania i przetwarzania próbek:

Materiały testowe: żel do separacji surowicy, pojemnik do pobierania próbek i gumowy korek, cewnik, płyn do płukania cewnika, proszek do rękawic itp.

Środek przeciwzakrzepowy: heparyna (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM) itp.;

Rozpuszczalniki organiczne: izopropanol (>0,1 IU/ml), betaina, sulfotlenek dimetylu, formamid, gliceryna, PEG itp.;

Środki dezynfekujące: alkohole (etanol >1%), aldehydy, fenole (fenol >0,2%), nadtlenki, mocne kwasy (HCL), mocne zasady (NaOH) itp.;

Detergent:SDS (>0,005%);

Gleba: Humus

Barwnik: Indygo

Inny.

W rzeczywistych warunkach pobierania próbek na zewnątrz, takich jak pobieranie próbek środowiskowych, próbki mogą zawierać różne substancje zakłócające, a skład substancji zakłócających w każdym miejscu jest inny, co wymaga przeprowadzania eksperymentów z interferencją PCR zgodnie z lokalnymi warunkami.

IV.Warunki przechowywania i transportu próbek

Świeżo pobrane próbki kliniczne należy przesłać do laboratorium w ciągu 2 do 4 godzin po pobraniu w temperaturze od 2°C do 8°C.Przechowywać w temperaturze 4 ℃ w ciągu 24 godzin.Próbki użyte do izolacji wirusa i wykrywania kwasów nukleinowych należy przebadać tak szybko, jak to możliwe.Próbki, które można zbadać w ciągu 24 godzin, można przechowywać w temperaturze 4°C;próbki, których nie można wykryć w ciągu 24 godzin, należy przechowywać w temperaturze -70°C lub niższej (jeśli nie – przechowywać w temperaturze 70°C w lodówce w temperaturze -20°C).

Streszczenie:Standaryzowane pobieranie, transport i przechowywanie próbek są niezbędne do dalszych badań.Fałszywe ujemne wyniki wielu testów laboratoryjnych są spowodowane niewłaściwym pobieraniem, transportem i przechowywaniem próbek, co prowadzi do degradacji wirusowego kwasu nukleinowego.Jednak wiele laboratoriów nadal ignoruje znaczenie pobierania próbek.Mam nadzieję, że ten artykuł zwróci uwagę wszystkich na samplowanie i sprawi, że samplowanie stanie się bardziej naukowe i rozsądne!

Powiązany produkt:

Zestaw do wykrywania kwasu nukleinowego Variant SARS-CoV-2 (I) (metoda multipleksowej sondy fluorescencyjnej PCR) — do wykrywania mutantów z Brazylii, RPA i Wielkiej Brytanii