• Facebook
  • Linkedin
  • youtube

Ustanowienie SOP eksperymentu PCR w celu standaryzacji zachowania personelu eksperymentu.

4.1

Eksperymentator ściśle przestrzega procedur operacyjnych i minimalizuje zanieczyszczenie PCR, które może być spowodowane czynnikami ludzkimi lub zapobiega występowaniu zanieczyszczeń.Ponadto eksperymentator powinien posiadać odpowiednią wiedzę i umiejętności zawodowe, w tym biegłość w obsłudze powiązanego sprzętu, wyjaśnienie całego procesu pracy, opanowanie metod leczenia zanieczyszczeń i laboratoryjnych metod kontroli jakości oraz umiejętność prawidłowej interpretacji wyników badań.

Ustanowienie standardowego laboratorium PCR.

4.2

Laboratorium PCR jest zasadniczo podzielone na cztery obszary, a mianowicie obszar przygotowania odczynników, obszar przetwarzania próbek, obszar amplifikacji i obszar analizy produktów amplifikacji.Pierwsze dwa obszary to obszary przedamplifikacyjne, a dwa ostatnie to obszary poamplifikacyjne.Strefa przedamplifikacyjna i strefa poamplifikacyjna powinny być ściśle oddzielone.Materiały eksperymentalne, odczynniki, papier rejestracyjny, długopisy, materiały czyszczące itp. mogą przepływać tylko z obszaru przed amplifikacją do obszaru po amplifikacji, tj.Przepływ powietrza w laboratorium powinien również przepływać z obszaru przed amplifikacją do obszaru po amplifikacji, a nie płynąć wstecz.Idealny projekt laboratorium PCR przedstawiono poniżej:

4.3

Rysunek A: Idealny tryb konfiguracji laboratorium PCR z podciśnieniem w pomieszczeniu buforowym

4.4

Rysunek B: Idealny tryb konfiguracji laboratorium PCR z dodatnim ciśnieniem w pomieszczeniu buforowym

Diagramy konfiguracji laboratorium PCR przedstawione na rysunku A i rysunku B powinny przedstawiać bardziej idealny tryb konfiguracji, a laboratorium z warunkami może odnosić się do tego trybu podczas projektowania.W zwykłych laboratoriach zaleca się oddzielenie obszaru amplifikacji PCR i obszaru analizy produktu oraz maksymalne ograniczenie otwarcia pokrywy w obszarze przygotowania próbki i obszarze amplifikacji PCR.Pamiętaj: Surowo zabrania się wnoszenia produktów i materiałów eksploatacyjnych znajdujących się w obszarze analizy produktów do obszaru przygotowywania próbek i obszaru amplifikacji PCR.

4.5

Jeśli laboratorium wykonuje tylko wykrywanie i identyfikację metodą PCR, zaleca się stosowanie fluorescencyjnej ilościowej reakcji PCR zamiast konwencjonalnej reakcji PCR.

Wyniki ilościowej detekcji fluorescencji PCR można zbierać i analizować za pomocą sygnałów fluorescencyjnych, więc nie ma potrzeby otwierania pokrywy do elektroforezy po reakcji, co pozwala uniknąć zanieczyszczenia produktu PCR spowodowanego wyciekiem produktów reakcji w celu utworzenia aerozoli.Jeśli zwiększysz liczbę otworów nasadki podczas etapu ładowania elektroforezy żelowej, prawdopodobnie wystąpi zanieczyszczenie aerozolem.Zaleca się promowanie stosowania ilościowego PCR i stopniowe zastępowanie jakościowego PCR.

Do reakcji PCR używany jest system anty-PCR firmy UNG do zanieczyszczenia produktu.

System używa dUTP zamiast dTTP.Po reakcji PCR wszystkie produkty PCR (fragmenty DNA) są inkorporowane z dUTP;w kolejnej rundzie reakcji PCR, dodany do układu enzym UNG jest inkubowany w 37°C przez 5 minut przed PCR, który może swoiście zdegradować wszystkie fragmenty DNA zawierające dUTP, a następnie przeprowadzić reakcję PCR.Może to całkowicie usunąć zanieczyszczenie aerozolem spowodowane przez produkty PCR.Efekt pokazano na poniższym rysunku:

4.6

Uwaga: W przypadku serii direct PCR można wybrać produkty seryjne systemu anty-PCR firmy ForegeneSugerować

W przypadku laboratoriów, które przeprowadzają testy genotypowania na dużą skalę, zdecydowanie zaleca się stosowanie systemu UNG anty-PCR do testowania odczynników, oprócz budowy rozsądnych laboratoriów.

Przypomnienie: Użycie tego systemu nie może usunąć zanieczyszczenia produktu PCR, które już zostało spowodowane.Dlatego system UNG powinien być używany na początku odpowiedniego testu, a system UNG powinien być używany do amplifikacji PCR, aby zapobiec zanieczyszczeniu produktów PCR Fałszywie dodatni.

Zaleca się stosowanie systemu Direct PCR-UNG firmy Foregene podczas przeprowadzania testów na dużą skalę, takich jak:

Zestaw do bezpośredniego PCR z liści roślin-UNG;

Zestaw do bezpośredniego PCR z nasionami roślin-UNG;

Zestaw do bezpośredniego PCR z tkankami zwierzęcymi-UNG;

Zestaw Direct PCR Myszy Ogon-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Ta seria zestawów firmy Foregenemoże nie tylko szybko i na dużą skalę przeprowadzać wykrywanie PCR, ale także skutecznie zapobiegać i kontrolować zanieczyszczenie produktu PCR.


Czas postu: 19 marca 2021 r