1: Wymień materiały eksploatacyjne na czas

Ustaw kontrolę negatywną (NTC) i powtórz ją wiele razy.Po stwierdzeniu, że w laboratorium występuje zanieczyszczenie produktem PCR, należy na czas wymienić wszystkie materiały eksploatacyjne.Takie jak: ponowne rozcieńczenie i przygotowanie starterów, ponowna sterylizacja końcówki pipety, probówki EP, ddH2O itp., wymiana pipety na nową i tymczasowe wypożyczenie innych laboratoriów do przeprowadzenia eksperymentów PCR.Zanieczyszczone laboratorium należy przewietrzyć i napromieniować promieniami ultrafioletowymi do czasu wyeliminowania zanieczyszczenia produktem PCR przed przystąpieniem do doświadczenia.

2: wydłuż czas ekspozycji na promieniowanie UV

Warto zaznaczyć, że aby usunąć zanieczyszczenie DNA, regularne naświetlanie ultrafioletem należy wydłużyć o 2 godziny niż zwykle.Mimo to wpływ naświetlania UV na usuwanie małych fragmentów (poniżej 200 pz) zanieczyszczeń DNA nie jest dobry.

Długość fali ultrafioletu (nm) wynosi na ogół 254/300nm i wystarczy naświetlać przez 30 minut.Należy zauważyć, że wybierając UV w celu wyeliminowania zanieczyszczenia pozostałych produktów PCR, należy wziąć pod uwagę długość produktu PCR i rozmieszczenie zasad w sekwencji produktu.Promieniowanie UV jest skuteczne tylko w przypadku długich fragmentów powyżej 500 pz i ma niewielki wpływ na krótkie fragmenty.

Podczas naświetlania UV zasady pirymidynowe w produkcie PCR będą tworzyć dimery.Te dimery mogą zakończyć wydłużanie, ale nie wszystkie pirymidyny w łańcuchu DNA mogą tworzyć dimery, a promieniowanie UV może również rozbić dimery..Stopień powstania dimeru zależy od długości fali UV, rodzaju dimeru pirymidynowego oraz sekwencji nukleotydów przylegających do miejsca dimeru.Dlatego też, jeśli amplifikowane w PCR fragmenty są małe, zaleca się stosowanie systemu zanieczyszczenia produktem UNG anty-PCR.

3: Powszechnie stosowane zmiatacze zanieczyszczeń DNA

Aerozole są łatwo generowane podczas dodawania pipet, czego trudno uniknąć, i szybko opadną.Dlatego bez wątpienia dobrym wyborem jest częste stosowanie specjalnych zmiataczy zanieczyszczeń DNA, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się zanieczyszczeń DNA.

4: Użyj systemu przeciw zanieczyszczeniom UNG

Po usunięciu zanieczyszczenia produktu PCR laboratorium badawcze może zastosować system zanieczyszczenia produktu UNG anty-PCR, aby zapobiec zanieczyszczeniu produktu PCR.W ogólnych laboratoriach można wykonać proste podziały eksperymentalne, ściśle oddzielić obszar produktu PCR od innych obszarów, ustalić określone zasady i przepisy laboratoryjne oraz przeprowadzić odpowiednie szkolenia, aby zapobiec wystąpieniu kontaminacji produktu PCR.

Zalecenia: Stworzenie rozsądnego laboratorium PCR, utrzymywanie dobrego środowiska PCR, sformułowanie standardowych procedur operacyjnych PCR i kultywowanie rygorystycznej świadomości operacyjnej eksperymentatorów to klucze do zapobiegania lub zmniejszania zanieczyszczenia eksperymentów PCR.