Narodziny PCR
PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy)
Od wynalezienia reakcji łańcuchowej polimerazy minęło już ponad 30 lat.Od ponad 30 lat, po tym, jak wielu uczonych na całym świecie kontynuuje uzupełnianie i ulepszanie, technologia PCR stała się najpowszechniej i najczęściej stosowaną oraz najważniejszą podstawową metodą badawczą w całej dziedzinie nauk przyrodniczych.
TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR itp. opracowane na podstawie szerokiego zastosowania tradycyjnej technologii PCR, a także nowo powstałej cyfrowej PCR (digital PCR), znacznie wzbogaciły metody badawcze większości badaczy naukowych i znacznie przyspieszyły proces rozwoju nowoczesnych nauk o życiu, zwłaszcza biologii molekularnej, wniosły wielki wkład w badanie życia i natury ludzkości jako całości.
Wady tradycyjnej technologii PCR
Separacja złożonych kwasów nukleinowych iekstrakcja:
★ Tradycyjna technologia PCR: wymagana
★ Technologia oparta na PCR: wymagana
★ Próbki DNA i RNA: duże różnice, trudne wymagania operacyjne
★ Zagrożenia dla ciała: toksyczne odczynniki szkodzą ciału
Tradycyjna technologia PCR i technologia pochodna mają warunek wstępny - separację i oczyszczanie kwasów nukleinowych
Każda próbka biologiczna musi przejść przez szereg skomplikowanych i żmudnych procesów przetwarzania w celu uzyskania próbek kwasów nukleinowych spełniających wymagania technologii PCR.
Separacja i ekstrakcja DNA i RNA zawsze była podstawowym zadaniem, które odpowiedni naukowcy muszą powtarzać każdego dnia.
Ze względu na ogromne różnice między próbkami, procesy rozdzielania i ekstrakcji DNA i RNA są również bardzo różne.Ta praca wymaga od operatorów wysokiego poziomu biegłości technicznej.Tradycyjne techniki separacji i ekstrakcji wymagają długotrwałego kontaktu z niektórymi wysoce toksycznymi odczynnikami chemicznymi.Spowoduje to nieodwracalne uszkodzenia ciała operatora, a nawet spowoduje bezpośrednie uszkodzenia podczas eksperymentu.
Jednocześnie dla tych, którzy mają dużą liczbę próbek do zbadania, separacja i ekstrakcja kwasów nukleinowych jest zadaniem pracochłonnym.
Dostępne na rynku zestawy do izolacji i ekstrakcji kwasów nukleinowych są już dojrzałe i istnieje wiele marek, ale są one z grubsza takie same.Niezależnie od tego, czy jest to zestaw do wirowania kolumny z membraną z żelu krzemionkowego, czy zestaw do metody z kulkami magnetycznymi, zajmuje to dużo czasu i jest kosztowne.Oprócz kosztu zestawu istnieją również specjalne wymagania dotyczące sprzętu laboratoryjnego.Zautomatyzowane stanowisko pracy stosowane w metodzie z kulkami magnetycznymi jest bardzo typowym sprzętem wielkogabarytowym o dużej wartości, co stanowi ogromny wydatek dla laboratorium.
W podsumowaniu
Przed przeprowadzeniem eksperymentów PCR wstępna obróbka próbek jest nieuniknionym i zawsze przyprawiającym o ból głowy badacza.Jak rozwiązać ten problem i czy można przeprowadzić eksperymenty PCR bez rozdzielania i ekstrakcji kwasów nukleinowych, od zawsze zastanawiała się większość naukowców i personelu laboratoriów klinicznych.
Rozwiązanie Foregene
Po latach żmudnych badań nad technologią Direct PCR i powiązanymi zestawami, Forgene z powodzeniem przełamał wiele wąskich gardeł i z powodzeniem osiągnął bezpośredni PCR dla wielu rodzajów różnych próbek o dużej odporności i zdolnościach adaptacyjnych, pozwalając naukowcom pozbyć się kłopotliwej i niebezpiecznej separacji i ekstrakcji kwasów nukleinowych.To znacznie zmniejszy pracochłonność wszystkich, przyspieszy proces eksperymentu i zaoszczędzi koszty badań naukowych i testów.
Zrozumienie i znajomość DirectPCR przez firmę Forgene
Po pierwsze, technologia DirectPCR to bezpośrednia technologia PCR dla różnych próbek tkanek biologicznych.W tych warunkach technicznych nie ma potrzeby oddzielania i ekstrakcji kwasów nukleinowych, a próbka tkanki jest bezpośrednio wykorzystywana jako obiekt, a startery genu docelowego są dodawane do reakcji PCR.
Po drugie, technologia DirectPCR to nie tylko tradycyjna technologia amplifikacji matrycy DNA, ale obejmuje również PCR z odwrotną transkrypcją matrycy RNA.
Po trzecie, technologia DirectPCR nie tylko bezpośrednio przeprowadza rutynowe jakościowe reakcje PCR na próbkach tkanek, ale obejmuje również reakcje qPCR w czasie rzeczywistym, co wymaga, aby system reakcyjny miał silną odporność na interferencję fluorescencji tła i antagonizowanie endogennych wygaszaczy fluorescencji.
Po czwarte, próbki tkanek docelowe dla technologii DirectPCR wymagają jedynie uwolnienia matryc kwasu nukleinowego i nie usuwają białek, polisacharydów, jonów soli itp., które zakłócają reakcję PCR.Wymaga to, aby polimeraza kwasu nukleinowego i mieszanina PCR w systemie reakcyjnym miały doskonałą zdolność przeciwdziałania odwracaniu i adaptacji oraz zapewniały aktywność enzymu i dokładność replikacji w złożonych warunkach.
Po piąte, próbki tkanek, na które ukierunkowana jest technologia DirectPCR, nie zostały poddane żadnemu zabiegowi wzbogacania w kwasy nukleinowe, a ilość matrycy jest bardzo mała, co wymaga niezwykle wysokiej czułości i wydajności amplifikacji układu reakcyjnego.
Wniosek
Technologia DirectPCR jest jednym z najważniejszych osiągnięć i innowacji technologicznych w ciągu ostatnich 30 lat od narodzin technologii PCR.Forgene jest i nadal będzie pionierem i innowatorem tej technologii.
Perspektywa zastosowania technologii DirectPCR jest bardzo szeroka.Ciągłe doskonalenie i upowszechnianie tej technologii z pewnością przyniesie wywrotowe zmiany w badaniach naukowych i pracach inspekcyjnych.To rewolucja w technologii PCR.
Czas postu: 21-02-2017
