• Facebook
  • Linkedin
  • youtube

W:Bracie, odwrotna transkrypcja dobiegła końca i wreszcie ostatni krok – fluorescencyjny ilościowy PCR!Hej, bracie, co to jest ilościowy PCR w czasie rzeczywistym?
M:PCR zawsze wiesz, prawda?
W: Wiesz, PCR to reakcja łańcuchowa polimerazy i jest to technologia, która zwiększa DNA!
M: To prawie… Jest to techniczna metoda amplifikacji docelowej sekwencji ponad milion razy przez specyficzne startery, ale to tylko wskazuje na obecność lub nieobecność docelowej sekwencji i nie pozwala na określenie ilości początkowej matrycy.Fluorescencyjny ilościowy PCR jest metodą techniczną opracowaną w celu rozwiązania tego problemu.PCR w czasie rzeczywistym i ilościowy PCR (qPCR) ogólnie odnoszą się do tego.
W:Różnica od zwykłego PCR polega na ilościowym oznaczeniu fluorescencji?
M: Tak, to znaczy na etapie wydłużania każdego cyklu PCR wykrywana jest intensywność sygnału fluorescencji, a początkowa ilość matrycy może być obliczana zgodnie ze zmianą intensywności sygnału.
W: To wydaje się takie skomplikowane!Czy mam to sam obliczyć?
M: To wymaga powolnego uczenia się, najlepiej jest zrozumieć zasadę.Teraz możesz skupić się najpierw na wartości CT, która jest stosunkowo intuicyjnymi danymi eksperymentalnymi, a jej wielkość odpowiada wielkości początkowej ilości szablonu.Istnieją również wykresy, takie jak krzywe amplifikacji i krzywe topnienia.To oni mają ostatnie słowo w kwestii tego, czy Twój eksperyment się powiedzie, czy nie.
W: Och, bracie.W takim razie zrobię eksperyment qPCR!
M: Zwróć szczególną uwagę, aby nie dodawać szablonów do obszaru odczynników, w przeciwnym razie nieużywana mieszanka będzie łatwo zanieczyszczona!
W: Rozumiem!

1

Zestaw Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I

Wyższa wydajność, większa specyficzność
Wysoka czułość, dobra kompatybilność

2 3


Czas postu: 22-07-2022