Wymaz z policzka/karta FTA Zestaw do izolacji DNA Zestaw do ekstrakcji lub oczyszczania genomowego DNA z wymazów z policzka
Opis zestawu:
Szybkie oczyszczanie wysokiej jakości genomowego DNA z próbek wymazów z jamy ustnej/kart FTA.
◮Brak zanieczyszczenia RNazą:Kolumna DNA-Only dostarczona w zestawie umożliwia usunięcie RNA z genomowego DNA bez dodawania RNazy podczas eksperymentu, zapobiegając zanieczyszczeniu laboratorium egzogenną RNazą.
◮Duża prędkość:Proteaza Foregene ma wyższą aktywność niż podobne proteazy i szybko trawi próbki tkanek;operacja jest prosta, a operację ekstrakcji genomowego DNA można zakończyć w ciągu 20-80 minut.
◮Wygodny:Wirowanie przeprowadza się w temperaturze pokojowej i nie ma potrzeby wirowania w niskiej temperaturze 4°C ani wytrącania DNA etanolem.
◮Bezpieczeństwo:Nie jest wymagana ekstrakcja odczynnikiem organicznym.
◮Wysoka jakość:Wyekstrahowany genomowy DNA ma duże fragmenty, nie ma RNA, nie ma RNaz i ma wyjątkowo niską zawartość jonów, co może spełnić wymagania różnych eksperymentów.
◮System mikroelucji:Może zwiększyć stężenie genomowego DNA, co jest wygodne do dalszej detekcji lub eksperymentu.
Opis
Ten zestaw zapewnia wydajną i szybką metodę uzyskiwania genomowego DNA o wysokim stężeniu z wymazów z jamy ustnej i karty FTA (plamy krwi).Korzystając z naszej firmy'Unikalna kolumna wirówkowa z membraną krzemionkową zawierającą wyłącznie DNA i formuła, w połączeniu z proteazą Foregene, umożliwiają ekstrakcję genomowego DNA o wysokim stężeniu i wysokiej jakości w ciągu 80 minut.Specjalnie zaprojektowana mała kolumna oczyszczająca wiąże genomowy DNA, a DNA można eluować niewielką ilością (15 μl) systemu elucji w celu zwiększenia stężenia otrzymanego genomowego DNA, co jest wygodne do dalszej detekcji lub eksperymentu.Zestaw może przetwarzać jedną lub więcej próbek jednocześnie, a proces oczyszczania nie wymaga ekstrakcji substancji organicznych, takich jak fenol, chloroform i czasochłonnego wytrącania izopropanolem lub etanolem, a operacja jest prosta i oszczędzająca czas.
Specyfikacje
50 Przygotowań
Elementy zestawu
| Bufor ST1 |
| Bufor ST2 |
| Liniowy akrylamid |
| Bufor PW |
| Bufor WB |
| Bufor EB |
| Proteaza Foregene |
| Kolumna zawierająca tylko DNA |
| Instrukcje |
Funkcje i zalety
Brak zanieczyszczenia RNazą: Kolumna zawierająca tylko DNA dostarczona w zestawie umożliwia usunięcie RNA z genomowego DNA bez dodawania RNazy podczas eksperymentu, unikając zanieczyszczenia laboratorium egzogenną RNazą.
-Szybka prędkość: Proteaza Foregene ma wyższą aktywność niż podobne proteazy, szybko trawi próbki;prosta obsługa.
-Wygoda: wirowanie odbywa się w temperaturze pokojowej i nie ma potrzeby wirowania w niskiej temperaturze 4°C ani wytrącania DNA etanolem.
-Bezpieczeństwo: nie jest wymagana ekstrakcja odczynnikiem organicznym.
-Wysoka jakość: wyekstrahowany genomowy DNA ma duże fragmenty, brak RNA, brak RNazy i wyjątkowo niską zawartość jonów, co może spełnić wymagania różnych eksperymentów.
-System mikro-elucji: może zwiększyć stężenie genomowego DNA, co jest wygodne do późniejszego wykrywania lub eksperymentu.
Aplikacja zestawu
Nadaje się do oczyszczania genomowego DNA z następujących próbek: wymazy z jamy ustnej, karta FTA (plamy krwi).
Przechowywanie i trwałość
-Ten zestaw można przechowywać przez 12 miesięcy w suchych warunkach w temperaturze pokojowej (15-25°C);jeśli ma być przechowywany przez dłuższy czas, można go przechowywać w temperaturze 2-8°C.
Uwaga: W przypadku przechowywania w niskiej temperaturze roztwór jest podatny na wytrącanie.Przed użyciem należy umieścić roztwór w zestawie w temperaturze pokojowej na pewien czas.W razie potrzeby podgrzać go w łaźni wodnej o temperaturze 37°C przez 10 minut w celu rozpuszczenia osadu i wymieszać przed użyciem.
- Roztwór Foregene Protease ma unikalną formułę, która jest aktywna przy przechowywaniu w temperaturze pokojowej przez długi czas (3 miesiące);jego aktywność i stabilność będą lepsze, gdy będzie przechowywany w temperaturze 4°C, dlatego zaleca się przechowywanie go w temperaturze 4°C, pamiętając, aby nie przechowywać go w temperaturze -20°C.
Kolumna oczyszczająca jest zatkana
W tym zestawie podczas operacji ekstrakcji genomowego DNA kolumna oczyszczająca jest bezpośrednio adsorbowana na próbce mieszaniny lizy enzymatycznej bez etapu wirowania, a kolumna oczyszczająca może zostać zablokowana z powodu niepełnej enzymizacji i wysokiej lepkości próbki.
Oto możliwe przyczyny:
1. Niepełne trawienie enzymatyczne próbek tkanek.
Zalecenie: Czas obróbki próbki Foregene Protease można odpowiednio wydłużyć lub pobrać supernatant po odwirowaniu przy 12 000 obr./min (~13 400 × g) przez 5 min.
2. Nadmierne użycie próbek tkanek lub dużych tkanek.
Zalecenie: Najlepiej nie przekraczać 1 wymazu z policzka w próbce;jeśli próbka jest zbyt duża, odpowiednio zwiększ dawkę Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2.
3. Lepkość próbki jest zbyt wysoka.
Zalecenie: Próbki można odpowiednio rozcieńczyć 10 mM Tris-HCl przed ekstrakcją genomowego DNA.
4. Fragmenty karty krwi zostały wyssane.
Zalecenie: Przejściowy czas wirowania w etapie 6 ekstrakcji genomowej plamki krwi (karta FTA) można odpowiednio wydłużyć.
Niska wydajność lub brak DNA
Często istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność genomowego DNA, w tym pochodzenie próbki, warunki przechowywania próbki, przygotowanie próbki, manipulacja itp.
Genomowego DNA nie można uzyskać podczas ekstrakcji
Możliwe przyczyny są następujące:
1. Niewłaściwa konserwacja próbek lub zbyt długie przechowywanie prowadzi do degradacji genomowego DNA.
Zalecenie: Próbki wymazów z jamy ustnej powinny być najlepiej świeże i nie zaleca się używania wymazów konserwowanych do operacji ekstrakcji genomowego DNA;próbki krwi powinny zapewniać kwalifikowaną jakość, a czas przechowywania nie powinien być zbyt długi.
2. Zbyt małe użycie tkanki może skutkować brakiem ekstrakcji odpowiedniego genomowego DNA.
Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami pobierania wymazu z policzka zawartymi w instrukcji obsługi i wycieraj tyle razy, ile to możliwe, aby do wymazu z jamy ustnej można było przyczepić wystarczającą liczbę komórek do ekstrakcji genomowego DNA;w celu pobrania próbki krwi obszar cięcia plamki krwi można odpowiednio zwiększyć.
3. Proteaza Foregene jest niewłaściwie zakonserwowana, co powoduje spadek jej aktywności lub inaktywację.
Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub wymień ją na nową Foregene Protease do reakcji enzymatycznej.
4. Niewłaściwa konserwacja zestawu lub zbyt długi czas przechowywania skutkujący uszkodzeniem niektórych elementów zestawu.
Zalecenie: Zakup nowego zestawu do izolacji DNA wymazu z policzka do powiązanych procedur.
5. Buffer WB nie dodaje etanolu absolutnego.
Zalecenie: Potwierdź, że bufor WB dodaje prawidłową objętość etanolu absolutnego.
6. Eluent nie został prawidłowo dodany do folii silikonowej.
Zalecenie: Dodaj krople eluentu ogrzanego do 65°C na środek membrany silikonowej i pozostaw w temperaturze pokojowej na 5 minut, aby zwiększyć skuteczność elucji.
Wyizolowany genomowy DNA o niskiej wydajności
Oto możliwe przyczyny:
1. Niewłaściwa konserwacja próbek lub zbyt długie przechowywanie prowadzi do degradacji genomowego DNA.
Zalecenie: Wymazy z jamy ustnej najlepiej pobierać ze świeżych próbek, a wymazów konserwowanych nie należy używać do ekstrakcji genomowego DNA.
2. Jeśli ilość próbki tkanki jest zbyt mała, zawartość wyekstrahowanego genomowego DNA będzie mniejsza.
Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami pobierania wymazu z jamy ustnej zawartymi w instrukcji obsługi, wycierając tyle razy, ile to możliwe, aby można było przyczepić do wymazówki wystarczającą liczbę komórek do ekstrakcji genomowego DNA.
3. Proteaza Foregene jest niewłaściwie zakonserwowana, co powoduje spadek jej aktywności lub inaktywację.
Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub wymień ją na nową Foregene Protease do reakcji enzymatycznej.
4. Problemy z eluentem.
Zalecenie: do elucji użyć Buffer EB;jeśli używasz ddH2O lub inne eluenty, potwierdź, że pH eluatu mieści się w zakresie 7,0-8,5.
5. Eluat nie jest prawidłowo dodawany kroplami.
Zalecenie: Dodaj krople eluentu na środek membrany silikonowej i pozostaw w temperaturze pokojowej na 5 min, aby zwiększyć skuteczność elucji.
6. Ciecz elucyjna gromadzi się za mało.
Zalecenie: Użyj eluentu do elucji genomowego DNA zgodnie z wymaganiami instrukcji, co najmniej nie mniej niż 15 μl.
Niska czystość wyizolowanego genomowego DNA
Niska czystość genomowego DNA może prowadzić do niepowodzenia lub niezadowalających wyników dalszych eksperymentów, takich jak: enzymy nie mogą zostać rozcięte, PCR nie może uzyskać interesującego fragmentu genu itp.
Możliwe przyczyny są następujące:
1. Zanieczyszczenie heteroproteinami, zanieczyszczenie RNA.
Analiza: Kolumny oczyszczającej nie przemywano buforem Buffer PW;kolumna oczyszczająca do przemywania Buffer PW nie została przemyta przy prawidłowej prędkości wirowania.
Zalecenie: Przed dodaniem etanolu należy upewnić się, że w supernatancie nie wytrącił się osad;pamiętaj, aby przemyć kolumnę oczyszczającą zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.
2. Zanieczyszczenie zanieczyszczeniem jonowym.
Analiza: Kolumnę oczyszczającą do przemywania buforem WB pominięto lub przemyto tylko raz, co skutkowało resztkowym zanieczyszczeniem jonowym.
Zalecenie: Pamiętaj, aby przemyć Buffer WB 2 razy zgodnie z zaleceniami, aby usunąć jak najwięcej resztkowych jonów.
3. Zanieczyszczenie enzymami RNA.
Analiza: Do buforu dodano obce RNazy;Operacja przemywania buforem PW była nieprawidłowa, co skutkowało pozostałościami RNazy, wpływającymi na późniejsze operacje eksperymentalne RNA, takie jak transkrypcja in vitro.
Zalecenie: Zestawy do izolacji kwasu nukleinowego z serii Foregene mogą usuwać RNA bez dodatkowego dodatku RNazy, dlatego zestaw do izolacji DNA wymazu z policzka/karty FTA nie wymaga dodawania RNazy;pamiętaj, aby postępować zgodnie z instrukcjami dotyczącymi przemywania kolumny oczyszczającej Buffer PW, a tego kroku nie można pominąć.
4. Pozostałość etanolu.
Analiza: Buffer WB nie wykonał wirowania z pustą probówką po przemyciu kolumny oczyszczającej.
Zalecenie: Wykonaj prawidłową operację wirowania pustej probówki zgodnie z instrukcjami.
5. Inne zanieczyszczenia.
Analiza: Zapisane próbki lub próbki specjalne nie są poddawane obróbce wstępnej.
Zalecenie: Dokładnie przygotować próbkę zgodnie z instrukcją.
